Gradiëntelutie en stapsgewijze elutie
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 1.122
Re: Gradi
Stel je hebt 4 moleculen die je wil scheiden op een C8 kolom. Molecuul 1 is vele malen polairder dan molecuul 4 en molecuul 2 en 3 zitten qua polariteit daar ergens tussen. Voor een goede scheiding kun je dan kiezen voor een lineaire gradiënt van bijv 20% Acetonitriel(ACN) naar 80% ACN. Bij 20% elueert je polaire molecuul vrij snel en richting de 80% ACN komt ook je sterk apolaire molecuul 4 van je kolom af.
Bij een step gradiënt run je bijv 10 minuten op 20% ACN waarna je direct in één stap naar de 80% gaat. Als je bijvoorbeeld drie van je moleculen van je kolom af hebt dan kun je in één stap naar een hoog percentage ACN gaan om snel molecuul 4 eraf te hebben. Of, je hebt slechts 2 moleculen met een groot verschil in polariteit. Dan is een gradiënt niet logisch en kun je voor de stepgradiënt gaan.
Een nadeel van een step-gradiënt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiënt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.
Duidelijk?
Bas
Bij een step gradiënt run je bijv 10 minuten op 20% ACN waarna je direct in één stap naar de 80% gaat. Als je bijvoorbeeld drie van je moleculen van je kolom af hebt dan kun je in één stap naar een hoog percentage ACN gaan om snel molecuul 4 eraf te hebben. Of, je hebt slechts 2 moleculen met een groot verschil in polariteit. Dan is een gradiënt niet logisch en kun je voor de stepgradiënt gaan.
Een nadeel van een step-gradiënt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiënt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.
Duidelijk?
Bas
-
- Berichten: 1.153
Re: Gradi
Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.bteunissen schreef: Een nadeel van een step-gradiënt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiënt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.
ps. hoe bevalt Duitsland?
-
- Berichten: 1.122
Re: Gradi
Klopt ook. Afhankelijk of je high of low pressure mixing hebt.JeroenCV schreef: Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.
ps. hoe bevalt Duitsland?
Blijft echter toch: hoe goed je pomp ook mixt; er blijft altijd een "front" in je tubing tussen de 20% en 80%. Dat mixt zich in-line doordat het simpelweg stroomt. En dát mixen kun je niet beïnvloeden. toch?
Prima. (full-time HPLC-en) Nog 2.5 maandjes en ik ben weer thuis.ps. hoe bevalt Duitsland?