Gradiëntelutie en stapsgewijze elutie

Moderator: ArcherBarry

Berichten: 8

Gradi

Hey!

Kunnen jullie mij duidelijke verschillen geven tussen deze 2 vormen van elutie? Zijn er nadelen aan verbonden? Worden ze onder bepaalde omstandigheden beter niet gebruikt?

Bedankt!

Greetzzz,

Annelies

Berichten: 278

Re: Gradi

welke (instrumentele) techniek? Dat kan helpen bij beantwoorden

Berichten: 8

Re: Gradi

HPLC en MPLC

Berichten: 2.399

Re: Gradi

Wat bedoel je met stapsgewijs? Isocratisch?

Berichten: 8

Re: Gradi

Gradiënt: met een bepaalde helling verhogen

Stapsgewijs: in stapjes verhogen, dus niet via 1 of andere rechte

Berichten: 1.122

Re: Gradi

Stel je hebt 4 moleculen die je wil scheiden op een C8 kolom. Molecuul 1 is vele malen polairder dan molecuul 4 en molecuul 2 en 3 zitten qua polariteit daar ergens tussen. Voor een goede scheiding kun je dan kiezen voor een lineaire gradiënt van bijv 20% Acetonitriel(ACN) naar 80% ACN. Bij 20% elueert je polaire molecuul vrij snel en richting de 80% ACN komt ook je sterk apolaire molecuul 4 van je kolom af.

Bij een step gradiënt run je bijv 10 minuten op 20% ACN waarna je direct in één stap naar de 80% gaat. Als je bijvoorbeeld drie van je moleculen van je kolom af hebt dan kun je in één stap naar een hoog percentage ACN gaan om snel molecuul 4 eraf te hebben. Of, je hebt slechts 2 moleculen met een groot verschil in polariteit. Dan is een gradiënt niet logisch en kun je voor de stepgradiënt gaan.

Een nadeel van een step-gradiënt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiënt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.

Duidelijk? :oops:

Bas

Berichten: 8

Re: Gradi

Héél duidelijk!

Bedankt!! :oops:

Berichten: 8

Re: Gradi

Voor een C18-kolom blijft deze uitleg hetzelfde veronderstel ik??

Berichten: 1.122

Re: Gradi

uiteraard!! Afbeelding

Berichten: 1.153

Re: Gradi

bteunissen schreef: Een nadeel van een step-gradiënt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiënt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.
Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.

ps. hoe bevalt Duitsland?

Berichten: 2.399

Re: Gradi

Voor de duidelijkheid

Beide zijn gradient eluties. Wat jij een gradient noemt is een lineare gradient. Staps gewijs is een stepgradient, maar je hebt ook nog andere gradienten, exponentiele etc.

Berichten: 1.122

Re: Gradi

JeroenCV schreef: Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.

ps. hoe bevalt Duitsland?
Klopt ook. Afhankelijk of je high of low pressure mixing hebt.

Blijft echter toch: hoe goed je pomp ook mixt; er blijft altijd een "front" in je tubing tussen de 20% en 80%. Dat mixt zich in-line doordat het simpelweg stroomt. En dát mixen kun je niet beïnvloeden. toch?
ps. hoe bevalt Duitsland?
Prima. (full-time HPLC-en) Afbeelding Nog 2.5 maandjes en ik ben weer thuis.

Berichten: 2.399

Re: Gradi

Vergeet de invloed van de kolom niet, met het bijbehorende vloeistof volume wat in de porieen zit. Voordat die gradient zich dan echt ingesteld heeft ben je een paar kolom volumes verder.

Berichten: 278

Re: Gradi

ps. hoe bevalt Duitsland?
Prima. (full-time HPLC-en) Afbeelding Nog 2.5 maandjes en ik ben weer thuis.
Op welk merk HPLC als ik vragen mag?

Berichten: 1.122

Re: Gradi

Dat mag je zeker vragen.

Ik werk met HPLC´s van Dionex. Een `Summit´ en een `Ultimate 3000´.

Bas

Reageer