Springen naar inhoud

Oplosbaarheid tyrosine


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 09:51

Hallo,

Ik wil tyrosine (aminozuur) oplossen in water probleem is dat tyrosine erg slecht oplosbaar is namelijk 45 mg/ 100 ml bij 25 graden Celcius.

Mijn vraag is of iemand weet hoe de oplosbaarheid toeneemt bij een toenemende temperatuur van het water?

Ik wil met deze oplossing bloed gaan spiken voor verder massaspectrometrisch onderzoek.

Ik weet dat aanzuren een optie is ik weet alleen niet wat het gevolgen voor het bloed is.

Graag jullie ideen.

Alvast bedankt,

Jeroen

Veranderd door Jeroen, 21 juli 2006 - 09:51

What we do in life echoes in eternity

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 09:58

Je kunt bijvoorbeeld eerst een stock oplossing maken in een organisch oplosmiddel. Vervolgens doorverdunning in water/organisch 50/50%. En dan weer doorverdunnen naar water/organisch 90/10% of 100% water. Dan heb je dus nog wel sporen organisch in je oplosmiddel. Maar met oplossen gaat het beter omdat je geleidelijk richting 100% water gaat. Als je uiteindelijk toch nog een oplossing met wat organisch oplosmiddel hebt en je gaat daar mee spiken dan zul je wel heel rustig en voorzichtig onder continue roeren je oplossing toe moeten voegen aan je bloed/plasma zodat deze niet denatureerd.

Nadeel van verwarmen is dat je oplosbaarheid wel wat toeneemt maar weer afneemt als je oplossing afkoelt.....

#3

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 10:26

Ik ben bang dat aminozuren erg slecht in organische oplosmiddelen oplossen.........
What we do in life echoes in eternity

#4

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 10:41

Aminozuren lossen inderdaad slecht op in organsiche oplosmiddelen, dit komt omdat ze zeer polair zijn en dus goed in water oplossen. De pH speelt een grote rol in welke hoeveelheid een aminozuur oplost, je moet zorgen dat 1 van de zure of basische groepen geprotoneerd/deprotoneerd is zodat je molecuul geladen is.
Aanzuren zal waarschijnlijk een proteine precipitatie tot gevolg hebben, of dit erg is kun je alleen zelf beoordelen, ik weet niet wat je precies wilt.

Voor massa spectrometrisch onderzoek is 45mg/100ml genoeg om 3uur na een een injectie nog tyrosine te meten. Ik spreek uit ervaring want ik heb net 9 maanden onderzoek naar dit aminozuur gedaan :oops:.

Heb je problemen repsons uit je systeem te krijgen? Je bent opzoek naar concentraties die helemaal niet in de natuur voor komen (deze overschrijden de oplosbaarheids regel nl ook niet), ik weet niet of dit je bedoeling is, maar houd dit even in je achterhoofd.

Veranderd door Napoleon1981, 21 juli 2006 - 11:01


#5

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 11:13

Nee het is de bedoeling om controles in bloed te maken voor een MS/MS methode voor de bepaling van o.a. tyrosine, daarom een hoge concentratie voor de hoge controle.

Aan respons op de tandem ms heb ik geen probleem die werkt perfect.

PS: heb je alleen met tyrosine gewerkt of ook met andere aminozuren zoals methionine?
What we do in life echoes in eternity

#6

The Herminator

    The Herminator


  • >1k berichten
  • 2035 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 11:18

Het idee van Bas werkt wel, als je maar polaire organische oplosmiddelen gebruikt.... en daar zijn er wel een paar van! :oops:

#7

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 21 juli 2006 - 11:30

Aminozuren lossen inderdaad slecht op in organsiche oplosmiddelen, dit komt omdat ze zeer polair zijn en dus goed in water oplossen. De pH speelt een grote rol in welke hoeveelheid een aminozuur oplost, je moet zorgen dat 1 van de zure of basische groepen geprotoneerd/deprotoneerd is zodat je molecuul geladen is.
Aanzuren zal waarschijnlijk een proteine precipitatie tot gevolg hebben, of dit erg is kun je alleen zelf beoordelen, ik weet niet wat je precies wilt.

Voor massa spectrometrisch onderzoek is 45mg/100ml genoeg om 3uur na een een injectie nog tyrosine te meten. Ik spreek uit ervaring want ik heb net 9 maanden onderzoek naar dit aminozuur gedaan  :oops:.

Heb je problemen repsons uit je systeem te krijgen? Je bent opzoek naar concentraties die helemaal niet in de natuur voor komen (deze overschrijden de oplosbaarheids regel nl ook niet), ik weet niet of dit je bedoeling is, maar houd dit even in je achterhoofd.

Mja de grote truc bij het oplossen van AZ is de pH van het slovent gelijkstellen aan de pI van je AZ. Hierbij ontstaat onder oplossen een zwitter-ion, dat zowel een geladen amine als zuurgroep heeft.

Veranderd door FsWd, 21 juli 2006 - 11:30


#8

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 12:11

Mja de grote truc bij het oplossen van AZ is de pH van het slovent gelijkstellen aan de pI van je AZ. Hierbij ontstaat onder oplossen een zwitter-ion, dat zowel een geladen amine als zuurgroep heeft.

Niet dus.........

volgens wikipedia klik

"In normale omstandigheden (25įC, pH=7, P=1bar) komen aminozuren in oplossing voor als zwitterionen: bij een neutrale zuurtegraad komt de zuurgroep als -COO- voor, terwijl het afgestane proton wordt opgenomen door de basische -NH2 en voorkomt als -NH3+. Hierdoor zijn aminozuren sterk geladen moleculen, wat resulteert in sterk intermoleculaire aantrekkingskrachten. Daarom lost de meerderheid van de aminozuren slecht op in water"

@Jeroen

Nee ik heb kort met het aminozuur tyrosine alleenstaand gewerkt. Ik ben snel over gegaan op proteines die dit aminozuur bevatten. Ik was daarbij speciaal geinteresseerd in een mogelijke post translational modificatie van tyrosine (3-nitro-tyrosine). Met methionine heb ik niet gewerkt.

#9

cipherIX

    cipherIX


  • >100 berichten
  • 181 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 12:43

Beste Jeroen,

Tyrosine (tyr) heeft als iso-elektrisch punt 5.7, dus wanneer je van neutraal naar licht zuur gaat (ca. pH 6), wordt de oplosbaarheid zelfs slechter !!
Basisch maken heeft meer zin, want zelfs de ∑OH-groep aan de fenyl heeft een beetje een zuur-karakter. De pH-waarde van bloed is 7.4, dus ook iets basisch.
Desondanks - Geplaatste afbeelding - Tyrosine lost slechts matig op in water, dus een hoge concentratie zul je met puur water niet bereiken.

Gegroet,
Martin

#10

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 12:46

De pKa van die phenol is 10, bij een pH 7,4 is deze dus nog geheel geprotoneerd, dus lang niet basisch genoeg. Als je wat wilt zul je naar 11 a 12 moeten gaan.
Deze pH is daar en tegen weer funest voor LC kolommen, die je waarschijnlijk gebruikt

Veranderd door Napoleon1981, 21 juli 2006 - 12:50


#11

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 13:19

Nee er wordt geen kolom gebruikt voor scheiding is niet nodig, wij werken met een flow injectie, d.w.z. flow gaat omlaag zodra de compnenten van de autosampler naar de tandem ms gaan. Heel de normale verdeling van de component gaat zo verloren maar dat moet juist.
Dit heeft als voordeel dat de componenten langer kunnen worden gedetecteerd omdat de ionisatietijd langer is.

Veranderd door Jeroen, 21 juli 2006 - 13:41

What we do in life echoes in eternity

#12

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 14:26

Wat zet je dan in je autosampler, gewoon de bloed monsters? Ik neem aan dat je wel iets van sample prep doet.

#13

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 15:00

bloed op filtreerpapier --> ponsje uit filtreerpapier + MeOH + interne standaard --> incuberen --> injecteren m.b.v. autosampler
What we do in life echoes in eternity

#14

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 15:36

bloed op filtreerpapier --> ponsje uit filtreerpapier + MeOH + interne standaard --> incuberen --> injecteren m.b.v. autosampler

En is dat reproduceerbaar vraag ik mij dan uit nieuwsgierigheid af?

#15

Jeroen_CF

    Jeroen_CF


  • >25 berichten
  • 91 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2006 - 17:26

Het gaat hier om een screenings methode naar een bepaald ziektebeeld namelijk tyrosinemie. De spreiding is dus ook best wel hoog VC ongeveer 15 % maar dat maakt namelijk niet zoveel uit, maar voor screeningsdoeleinden is deze bepaling goed reproduceerbaar.

Mensen met dit ziektebeeld hebben een extreem hoge waarde tyrosine in hun bloed terwijl mensen die niet deze ziekte hebben een redelijk lage tyrosine concentratie in hun bloed dus deze wordt er toch wel tussenuit gepikt.
What we do in life echoes in eternity





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures