Zijn er nog mensen die in het labo werken met een Merck Hitachi HPLC met Autosampler L-7200 La Chrom ?
Ik ben momenteel bezig met het uitvoeren van een OQ, en ben de injection volume accuracy en reproducibility aan het nagaan.
Ik heb meerdere malen (via de software) de opdracht gegeven 25µl te injecteren in het systeem (25µl weergegeven op het scherm van de autosampler). Nu, door weging van de vial voor en na de verschillende injecties, merk ik dat er geen 25µl maar ongeveer 82µl wordt geïnjecteerd. Bij de instelling 20 en 10µl wordt er eveneens een verschillend volume geïnjecteerd (respectievelijk ongeveer 79 en 65µl) Er hangt een sample loop aan van 100µl, heeft dit een belangrijke invloed ?
Weet iemand raad ?
tnx
Laatste berichten
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
08:29
Programmeren met vectoren 5
-
23:12
speciale rel. theorie 10
-
22:57
wig 6
-
22:36
Gravity and gravitation 4
-
22:24
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 10
-
19:47
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
19:44
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
19:12
Rood laserlicht 3
-
17:30
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
16:34
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 3.507
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Ik ken het systeem niet, maar volgens deze PDF moet het systeem geschikt zijn om een partiële loop injectie uit te voeren. Wellicht staat er een verkeerde loopgrootte ingesteld (250 µL of zoiets)?
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!
-
- Berichten: 7
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Bedankt voor de pdf file, dat zet alles nog even op een rijtje.
Ik keek even de instellingen in de methode na en volgens mij zijn deze juist nl.
syringe volume=500µl nl. de spuit die er standaard op staat
injection method=cut (ipv all of loop)
wat is eigenlijk de exacte functie van de spuit ? zorgt deze voor het opzuigen van het exacte injectievolume ? Ik weet dat dat het geval is bij vb. een Waters Alliance systeem (dacht ik toch), maar deze Merck Hitachi is heel wat jaartjes ouder.
Ik keek even de instellingen in de methode na en volgens mij zijn deze juist nl.
syringe volume=500µl nl. de spuit die er standaard op staat
injection method=cut (ipv all of loop)
wat is eigenlijk de exacte functie van de spuit ? zorgt deze voor het opzuigen van het exacte injectievolume ? Ik weet dat dat het geval is bij vb. een Waters Alliance systeem (dacht ik toch), maar deze Merck Hitachi is heel wat jaartjes ouder.
-
- Berichten: 3.507
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Zoals ik al zei, ik ken dat systeem niet, maar volgens mij is het in grote lijnen hetzelfde als een spectra physics waar ik een klein beetje ervaring mee heb. De spuit daarin werd gebruikt om het monster op te zuigen en om de loop na de injectie te spoelen.
Je weet zeker dat je de juiste spuit hebt geïnstalleerd?
Je weet zeker dat je de juiste spuit hebt geïnstalleerd?
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!
-
- Berichten: 7
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
De spuit (500µl) en sample loop (100µl) die er nu op zitten zijn deze die er standaard op zitten, en ze staan ook beschreven in de manual.
ik denk eveneens dat ook hier de spuit dient om het ingestelde volume op te zuigen, en om de loop te spoelen. Jammergenoeg is de manual heel vaag over de exacte werking..
Ik heb de spuit reeds laten spoelen met water en methanol, maar ik zag geen verschil. Ik dacht dat daar mogelijks een invloed kon zijn.
t is me een raadsel ! en ik ben wel een beetje geschrokken dat het injectievolume totaal fout blijkt te zijn. er gebeuren voornamelijk R&D analyses op, maar toch..
ik denk eveneens dat ook hier de spuit dient om het ingestelde volume op te zuigen, en om de loop te spoelen. Jammergenoeg is de manual heel vaag over de exacte werking..
Ik heb de spuit reeds laten spoelen met water en methanol, maar ik zag geen verschil. Ik dacht dat daar mogelijks een invloed kon zijn.
t is me een raadsel ! en ik ben wel een beetje geschrokken dat het injectievolume totaal fout blijkt te zijn. er gebeuren voornamelijk R&D analyses op, maar toch..
-
- Berichten: 1.122
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Volgens mij is het normaal dat je meer uit je vial zuigt dan dat je werkelijk injecteerd. Een deel van je opgezogen analiet wordt geinjecteerd en de rest gaat naar de waste.
Je zegt:
Dat is hét grote nadeel van dergelijke injectie methoden. Er gaat altijd relatief veel monster verloren omdat niet 100% geïnjecteerd wordt.
Je zegt:
Is het dus niet zo dat het verschil in gewicht van je vial voor en na injectie overeenkomt met 82µl omdat dát opgezogen wordt, maar dat er uiteindelijk maar 25µl in je flow geïnjecteerd wordt?!Nu, door weging van de vial voor en na de verschillende injecties, merk ik dat er geen 25µl maar ongeveer 82µl wordt geïnjecteerd
Dat is hét grote nadeel van dergelijke injectie methoden. Er gaat altijd relatief veel monster verloren omdat niet 100% geïnjecteerd wordt.
-
- Berichten: 2.399
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Volgens mij zuigen ze vaak meer op dan nodig is. Een autosampler werkt het nauwkeurigst wanneer eerst een klein beetje sample in de waste gespoten wordt, dan het gewenste volume wordt geinjecteerd en er daarna nog wat achterblijft in de spuit en leidingen. Dit restant verdwijnt dan ook weer in een waste.
Dit principe pas je zelf ook toe bij een injectie spuit, eerst spuit je de lucht er uit, en verlies je dus was vloeistof. Het laatste beetje gaat er ook lastig uit, dus dat gebruik je ook liever niet. Ik heb zelf eens een methode op een tecan pipetteer station opgezet en alles had te maken met nauwkeurigheid tegen sample loss.
Edit: bas was me voor
Dit principe pas je zelf ook toe bij een injectie spuit, eerst spuit je de lucht er uit, en verlies je dus was vloeistof. Het laatste beetje gaat er ook lastig uit, dus dat gebruik je ook liever niet. Ik heb zelf eens een methode op een tecan pipetteer station opgezet en alles had te maken met nauwkeurigheid tegen sample loss.
Edit: bas was me voor
-
- Berichten: 7
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Hmmm.. dat kan misschien wel ? Dat er inderdaad slechts 25µl in de flow komt, maar dan vraag ik me af waar en hoe die 'selectie' van het juiste volume gebeurt.
Zoals ik al zei, we hebben hier ook een Waters Alliance, en daar kan je exact wegen wat er geïnjecteerd wordt. Het is dan natuurlijk ook een veel recenter systeem.
Iemand mogelijks een ander idee om de accuracy en reproducibility te testen van het injection volume ?
Zoals ik al zei, we hebben hier ook een Waters Alliance, en daar kan je exact wegen wat er geïnjecteerd wordt. Het is dan natuurlijk ook een veel recenter systeem.
Iemand mogelijks een ander idee om de accuracy en reproducibility te testen van het injection volume ?
-
- Berichten: 2.399
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Het eerste beetje vloeistof heette een conditioning volume en moest iets van 10% van het te pipetteren volume zijn op het tecan system etc.
Je kon hier dus allerlei waarden voor invoeren die systeem afhankelijk zijn. De nauwkeurigheid van je diluter, de inhoud van je leidingen etc. De range van je diluter is ook belangrijk, een 1000ul diluter zal minder nauwkeurig zijn dan een 100ul diluter etc. Bij een commerciele autosampler zal dit allemaal wel uitgedacht zijn.
Je punt over validatie,
Ik zou het volgende doen om de accuracy te testen. Zet er eens een 25 ul loop op. Injecteer 100 ul en bereken je piek oppervlak. Dan zet je er een 100ul loop op en injecteer je 25ul sample, je piek oppervlak moet niet veranderen.
De andere waarde is niet reproducibility maar repeatability (herhaalbaarheid). Dit is simpel, injecteer gewoon eens 7 keer, en bereken de variantie in je piek area.
Je kon hier dus allerlei waarden voor invoeren die systeem afhankelijk zijn. De nauwkeurigheid van je diluter, de inhoud van je leidingen etc. De range van je diluter is ook belangrijk, een 1000ul diluter zal minder nauwkeurig zijn dan een 100ul diluter etc. Bij een commerciele autosampler zal dit allemaal wel uitgedacht zijn.
Je punt over validatie,
Ik zou het volgende doen om de accuracy te testen. Zet er eens een 25 ul loop op. Injecteer 100 ul en bereken je piek oppervlak. Dan zet je er een 100ul loop op en injecteer je 25ul sample, je piek oppervlak moet niet veranderen.
De andere waarde is niet reproducibility maar repeatability (herhaalbaarheid). Dit is simpel, injecteer gewoon eens 7 keer, en bereken de variantie in je piek area.
-
- Berichten: 7
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Dan was mijn voorgaande stelling fout nl toen ik ze "ik denk eveneens dat ook hier de spuit dient om het ingestelde volume op te zuigen" maar gebeurt het inbrengen van het correcte injectievolume intern.
De spuit dient enkel om de loop grofweg te vullen en spoelen.
ik keek nog eens verder in de software en zie dat ik volgende opties heb:
-instelling 'cut' bij injection method ; rear volume en lead volume zijn in te vullen
-instelling 'all' bij injection method ; feed volume in te vullen
-instelling 'loop' bij injection method ; injection volume en waste volume in te vullen
de instellingen staan altijd standaard op all, met een rear en lead volume van 30µl, dat was steeds zo van voor ik hier kwam werken, en had me er eerder nooit vragen bij gesteld.
De spuit dient enkel om de loop grofweg te vullen en spoelen.
ik keek nog eens verder in de software en zie dat ik volgende opties heb:
-instelling 'cut' bij injection method ; rear volume en lead volume zijn in te vullen
-instelling 'all' bij injection method ; feed volume in te vullen
-instelling 'loop' bij injection method ; injection volume en waste volume in te vullen
de instellingen staan altijd standaard op all, met een rear en lead volume van 30µl, dat was steeds zo van voor ik hier kwam werken, en had me er eerder nooit vragen bij gesteld.
-
- Berichten: 2.399
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
Ok dan zijn we er, 30+30 = 60 dan komt er nog 25ul sample bij en krijg je dus een volume van 85ul. Dat je dan een verschil van 82ug weegt lijkt me opeens acceptabel. 
-
- Berichten: 7
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
aahaaaa, juist !
man man ik ben ook geen groot licht vandaag
dat is al een probleem van de baan. Nu nog kijken waarom ik met een enorme variabiliteit zit.. ik heb RSDs van ongeveer 4%, waar de specificatie 2% is. Maar dat komt misschien omdat de 2x 30µl niet echt exact zijn ?
de reproduceerbaarheid wordt getest omdat het telkens gaat over meerdere injecties uit verschillende vials.
Alvast bedankt voor de hulp !
man man ik ben ook geen groot licht vandaag
dat is al een probleem van de baan. Nu nog kijken waarom ik met een enorme variabiliteit zit.. ik heb RSDs van ongeveer 4%, waar de specificatie 2% is. Maar dat komt misschien omdat de 2x 30µl niet echt exact zijn ?
de reproduceerbaarheid wordt getest omdat het telkens gaat over meerdere injecties uit verschillende vials.
Alvast bedankt voor de hulp !
-
- Berichten: 2.399
Re: Merck Hitachi Autosampler L-7200 La Chrom
De variabiliteit die jij meet komt waarschijnlijk uit injector + systeem (dus HPLC, detector etc). De RSD die hun geven gaat over de fout in geinjecteerd sample volume, en dus niet over de rest. Wanneer je de RSD weet van je systeem kun je deze aftrekken van de totale RSD en zo de RSD van de injector uitrekenen. Een RSD van 4% lijkt me keurig hoor.
Reproduceerbaarheid (de officiele definitie) = is hetzelfde monster meten op verschillende systemen in verschillende laboratoria door verschillende mensen, met hetzelfde protocol, apparatuur en glaswerk. Maargoed ik ben hier een enorme mieren.... in daar ben ik me van bewust
Reproduceerbaarheid (de officiele definitie) = is hetzelfde monster meten op verschillende systemen in verschillende laboratoria door verschillende mensen, met hetzelfde protocol, apparatuur en glaswerk. Maargoed ik ben hier een enorme mieren.... in daar ben ik me van bewust
