piek komt bijna onvertraagd

Napoleon1981

Ok dan kom ik toch weer op de pH en pKa van die aminen. De pKa van zo'n amine ligt volgens mij in de buurt van de 10

Ik heb het maar even opgezocht klik. Weet je zeker dat de pKa van jouw aminen 6.2 is?

Uncle Paulie

ik heb geen directe duidelijke link voor je, maar de stof waarmee ik bezig ben heet triamterene

'triamterene pka' bij google levert meerdere bronnen waar een pka van 6.2 gemeld wordt, net als de literatuur die ik hier voor me heb liggen.

btw...ik heb weer wat retentie (Tr=5min)

maar ik zit nu met een acetonitril concentratie van 10%. Ik vroeg me af of dit nog gewoon kan op een C18 kolom ? in het verleden ben ik vaker een slechte herhaalbaarheid/reproduceerbaarheid tegengekomen met lage concentraties modifier. Anders maar even met MeOH proberen

bteunissen

Het verschilt nogal denk ik of je de gemiddelde pKa van het molecuul neemt of de pKa per groep! Gemiddeld kan deze best 6.2 zijn als je de amine en de zuurgroep pKa middeld.

JeroenCV

Op een C18 kolom kan je makkelijk tot 5% of zelfs 2% modifier gaan hoor.

Maar wat ik niet snap is waarom je niet met een buffer werkt. Je zegt "omdat er geen matrix is". Volgens mij buffer je een systeem niet omdat er een matrix is maar voor de analiet.

Het lijkt me nu duidelijk dat je toch echt met de pH moet gaan werken. Je hebt de percentage modifier geprobeerd.

Wat je nu eerst moet doen is een simpele test met wat parabenen op je LC-systeem doen; dan weet je of je kolom/systeem goed werkt.

Daarna een gebufferde oplossing maken en die bij verschillende pH's proberen. En hierin ongeveer 30% modifier. Geeft dit geen retentie, dan kan je nog eens een ion-pairing reagens gebruiken.

systematisch te werk gaan helpt.

Napoleon1981

10% kan prima hoor.

Wat bas zegt is waar, al heeft dit molecuul geen zure groep. De pKa van een zure groep kan trouwens ook hoger zijn dan die van een basische groep dus dat zie ik niet zo. Ik kan me wel voorstellen dat de gemiddelde pKa hier rond de 6.2 zal liggen, omdat de pyridine ring een pKa van plus minus 2 zal hebben.

edit: jeroen is me weer voor

. Even aan de hand van de post van jeroen. Wat versta je nu onder een pH van 8.5, had je alleen de matrix aangepast of ook de buffer van je eluens?

Napoleon1981

Ah ik had niet goed naar de molecuul formule gekeken (dacht dat we het over een 3 ringen aromaat hadden met 3 stikstof atomen er in), probeer volgende keer een structuur formule te posten dat werkt verhelderend in dit soort discussies. Ik kan me hier wel voorstellen dat dit niet gaat werken. Zijn ook geen 2 maar 3 amine groepen. Dit molecuul is veel te polair voor een C18 kolom.

Nog maar even een vuistregeltje voor het gebruik van een C18 kolom. De kolom werkt ideaal bij ongeveer 6 tot 12 koolstof atomen per functionele groep.

Uncle Paulie

bedankt voor de info en hulp 8-[

Ik ga weer even verder spelen

We willen zoveel mogelijk analyses zo eenvoudig mogelijk maken, zelfde kolom, zelfde eluens (gebufferd op pH3.5) dat we al voor andere analyses gebruiken enz enz.

omdat dit erg weinig opleverde ben ik de pH van zowel mijn eluens als ook mijn standaard gaan veranderen, met de aanname dat als mijn eluens pH8.5 is en mijn monster ook dat het geheel nu nog niet gebufferd hoeft te zijn omdat ik nu met een vereenvoudigd geheel bezig ben (standaarden in water ipv matrix) e.d.

...een van mijn favoriete quotes die ik hier ook al gepost hebt doet zijn werk weer..

''assumption is the mother of all fuc k-ups''. ik ben niet laag genoeg gegaan met mijn modifier omdat ik aannam dat dat niet ging.

edit : ik ben nog niet zo handig met het posten van plaatjes e.d

Napoleon1981

Nog even een opmerking, gebruik ALTIJD een buffer in de mobiele fase. Geloof mij dat gaat je een ontzettende bak ellende besparen. Ongebufferde systemen kunnen heel makkelijk verlopen en geven dus slecht reproduceerbare resultaten.

cheMister

Ik wil ff terugkomen of temperatuur al dan niet een invloed heeft op selectiviteit.

1)

Ik werk met chirale kolommen en hierbij kan het gebeuren dat ik bij 40°C geen scheiding heb tussen mijn enantiomeren en bij 15°C er een camion kan tussen parkeren.

2)

Vanaf 100°C is water apolair en is de selectiviteit anders dan die van water bij bv. 20°C.

bteunissen

cheMister schreef: 2)

Vanaf 100°C is water apolair en is de selectiviteit anders dan die van water bij bv. 20°C.

Je hebt gelijk, maar dan hebben we het niet meer over normale HPLC maar over High Temperature Liquid Chromatography (HTLC)..... dus dat is in dit geval niet helemaal eerlijk.

Wat ik mij afvraag. De temperatuur van je kolom bepaald de mass transfer van je anliet tijdens de scheiding. Daarom heeft een verhoogde temperatuur (in het algemeen een positieve) invloed op je scheiding als je even niet kijkt naar de stabiliteit van je analiet. Echter, verschilt de toename in mass transfer voor elk molecuul in gelijke mate bij stijgende temperatuur...? Als dat niet zo is dan veranderd je selectiviteit dus wel degelijk bij varierende temperaturen..

Bas

cheMister

Bij chirale kolommen is een lagere temperatuur positiever voor de scheiding omdat het een enthalpie gedreven scheiding is. De enthalpieverschillen zijn zeer klein tussen de enantiomeren zodat bij een hogere temperatuur het relatief verschil miniem wordt en de enantioselectiviteit verdwijnt.

De efficientie wordt wel kleiner.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd

Re: piek komt bijna onvertraagd