Springen naar inhoud

EcoR1


  • Log in om te kunnen reageren

#1

RapTom

    RapTom


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 september 2006 - 15:29

Wij zijn op school bezig met een project en nu wouden wij proberen om EcoR1 te gaan cloneren en te zuiveren en eventueel te gaan gebruiken.

Nou is mijn vraag: is dit mogelijk en zoja is het voor ons HBO-studenten ook mochelijk en haalbaar?

Ook zoek ik nog naar informatie over eventuele knipplaatsen, de juiste restrictie-enzymen en primers voor de PCR.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 september 2006 - 16:56

Ik denk niet dat dit mogelijk is voor een HBO student.

De juiste primers staan niet zomaar even op internet.
Je moet een geschikte expressie vector hebben waar een goede selectie op zit.
Hiervoor kan je bijvoorbeeld pGEM of pCDNA3 e.a. gebruiken.
Je gen moet je daarna hierin ligeren. De Restrctie enzym plaatsen kan je zelf bepalen. Hierna zul de bacteriŽn moeten transformeren zodat er een overexpressie komt van je enzym.
Daarna begint het moeilijke gedeelte.
Je moet alle informatie over het enzym weten; lading enz enz zodat je het enzym kan zuiveren uit je cellen. Dit is echter een zeer lastig karwei.
Het is wel mogelijk om een theoretisch plan op te stellen over het zuiveren van je enzym.
Praktisch lijkt mij dit te duur en te moeilijk.

#3

RapTom

    RapTom


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 september 2006 - 19:00

Bedankt Roy.

Eigenlijk waren wij daar ook al bang voor dat het te duur en te moeilijk zal worden. maar toch bedankt.

Weet jij misschien wel een ander enzym dat voor ons wel haalbaar is.

#4

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 02 oktober 2006 - 09:04

Is het misschien een idee om plasmide over te brengen naar E.Coli en dan met behulp van selectieve voedingsplaten kijken hoeveel bacterien hier op groeien. (voorbeeld plasmide voor een bescherming van een bepaalde antibioticum) Is niet echt een moeilijk experiment, maar je krijgt wel een idee over de werking van plasmides. Het knippen van plasmides kun je wel theoretisch goed uitwerken alleen is de vraag hoeveel geld heeft jouw leraar daarvoor over om dit ook werkelijk uit te voeren.

MvG Ron

#5

RapTom

    RapTom


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 oktober 2006 - 16:14

Dit doen wie al met ons de praktijk maar nu willen wij met ons project de zuiverings stap er ook bij doen.

#6

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 oktober 2006 - 20:04

Zuiveren kost wel al snel een hoop meer geld.
Hiervoor heb je kolommen nodig om je cel fracties op te scheiden.
Het is wel mogelijk om een zuivering op een kleine schaal toe te passen met een western blot.

Kijk of je op school antistoffen hebt tegen bepaalde eiwitten van bacterien.
Door cellysaat van je bacterien te nemen en deze op een PAGE gel te zetten, kan je je eiwitten scheiden op moleculair gewicht.
Vervolgens kan je dit blotten en je gewenste eiwit kleuren met een antistof-antigeen complex.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures