Wij zijn op school bezig met een project en nu wouden wij proberen om EcoR1 te gaan cloneren en te zuiveren en eventueel te gaan gebruiken.
Nou is mijn vraag: is dit mogelijk en zoja is het voor ons HBO-studenten ook mochelijk en haalbaar?
Ook zoek ik nog naar informatie over eventuele knipplaatsen, de juiste restrictie-enzymen en primers voor de PCR.
Laatste berichten
-
13:46
lorentzfactor moeilijke formule, makkelijk in een cirkel 30
-
13:32
Veeltermfunctie 3
-
12:05
Structuur dopamine-agonist
-
09:43
Casus uit de praktijk: positief test THC 39
-
21:53
[wiskunde] Hoe werk ik dit verder uit naar de vorm ln(a + b sqrt(2))? 2
-
21:23
Zeepbeldiameter 1
-
21:03
Sommige fotonen die weg van ons gestuurd worden , kunnen we toch zien
-
16:58
Het woord dat in alle talen bestaat
-
14:21
[wiskunde] Wat gebeurt er in deze herleidingstap? 2
-
10 mei
Afgeleide 36
-
09 mei
Aardlek-schakelaar 50
-
09 mei
[wiskunde] Hoe moet ik dit primitiveren? 16
-
09 mei
snelheid 2
-
08 mei
Mechanicaboeken 6
-
08 mei
Python: fout in programma om strings te vergelijken 15
-
08 mei
tijdsduur 9
-
07 mei
[wiskunde] Wat is de afgeleide van ln^2(x)? 2
-
07 mei
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij 2
-
07 mei
[wiskunde] Waarom MOET het met behulp van de substitutie methode? 1
-
06 mei
is er een 5e dimensie nodig voor gekromde ruimte-tijd? 13
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
EcoR1
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 740
Re: EcoR1
Ik denk niet dat dit mogelijk is voor een HBO student.
De juiste primers staan niet zomaar even op internet.
Je moet een geschikte expressie vector hebben waar een goede selectie op zit.
Hiervoor kan je bijvoorbeeld pGEM of pCDNA3 e.a. gebruiken.
Je gen moet je daarna hierin ligeren. De Restrctie enzym plaatsen kan je zelf bepalen. Hierna zul de bacteriën moeten transformeren zodat er een overexpressie komt van je enzym.
Daarna begint het moeilijke gedeelte.
Je moet alle informatie over het enzym weten; lading enz enz zodat je het enzym kan zuiveren uit je cellen. Dit is echter een zeer lastig karwei.
Het is wel mogelijk om een theoretisch plan op te stellen over het zuiveren van je enzym.
Praktisch lijkt mij dit te duur en te moeilijk.
De juiste primers staan niet zomaar even op internet.
Je moet een geschikte expressie vector hebben waar een goede selectie op zit.
Hiervoor kan je bijvoorbeeld pGEM of pCDNA3 e.a. gebruiken.
Je gen moet je daarna hierin ligeren. De Restrctie enzym plaatsen kan je zelf bepalen. Hierna zul de bacteriën moeten transformeren zodat er een overexpressie komt van je enzym.
Daarna begint het moeilijke gedeelte.
Je moet alle informatie over het enzym weten; lading enz enz zodat je het enzym kan zuiveren uit je cellen. Dit is echter een zeer lastig karwei.
Het is wel mogelijk om een theoretisch plan op te stellen over het zuiveren van je enzym.
Praktisch lijkt mij dit te duur en te moeilijk.
-
- Berichten: 2.330
Re: EcoR1
Is het misschien een idee om plasmide over te brengen naar E.Coli en dan met behulp van selectieve voedingsplaten kijken hoeveel bacterien hier op groeien. (voorbeeld plasmide voor een bescherming van een bepaalde antibioticum) Is niet echt een moeilijk experiment, maar je krijgt wel een idee over de werking van plasmides. Het knippen van plasmides kun je wel theoretisch goed uitwerken alleen is de vraag hoeveel geld heeft jouw leraar daarvoor over om dit ook werkelijk uit te voeren.
MvG Ron
MvG Ron
-
- Berichten: 740
Re: EcoR1
Zuiveren kost wel al snel een hoop meer geld.
Hiervoor heb je kolommen nodig om je cel fracties op te scheiden.
Het is wel mogelijk om een zuivering op een kleine schaal toe te passen met een western blot.
Kijk of je op school antistoffen hebt tegen bepaalde eiwitten van bacterien.
Door cellysaat van je bacterien te nemen en deze op een PAGE gel te zetten, kan je je eiwitten scheiden op moleculair gewicht.
Vervolgens kan je dit blotten en je gewenste eiwit kleuren met een antistof-antigeen complex.
Hiervoor heb je kolommen nodig om je cel fracties op te scheiden.
Het is wel mogelijk om een zuivering op een kleine schaal toe te passen met een western blot.
Kijk of je op school antistoffen hebt tegen bepaalde eiwitten van bacterien.
Door cellysaat van je bacterien te nemen en deze op een PAGE gel te zetten, kan je je eiwitten scheiden op moleculair gewicht.
Vervolgens kan je dit blotten en je gewenste eiwit kleuren met een antistof-antigeen complex.
