Springen naar inhoud

western blotting


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Broekhem

    Broekhem


  • >100 berichten
  • 102 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 oktober 2006 - 12:45

Ey mensen,

Ik vind nergens een goede site voor western blotting in het nederlands. Het is niet dat m'n engels slecht is, maar het is toch altijd wel fijn als je een site hebt, die makkelijker en sneller te lezen is :oops: .

Dus mijn vraag is uiteraard, heeft iemand een goede site van western blotting in het nederlands.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 oktober 2006 - 15:23

Ik zie zo gauw ook geen goede site. Je moet denk ik toch maar de Engelse gebruiken. Hier kort nog wat NL info:

SDS-PAGE:
Eiwitten worden natief of met toevoeging van SDS (denatureert) op een polyacrylamide gel gescheiden. SDS heeft een negatieve lading en zorgt dat alle eiwitten gelijkwaardig naar hun lengte migreren bij blootstelling aan een spanningsveld.

Western Blot:
Het blotten zelf gebeurt door een membraan (nitrocellulose of celluloseacetaat) op de gel te leggen en een spanningsveld verticaal er overheen te laten lopen.
Als gevolg komen de eiwitten op het membraan terecht, waarna ze specifiek worden aangetoond met antilichamen (2 sets)

Het primaire antilichaam is zeer specifiek, en het tweede is een algemeen antilichaam (bijv. geit anti-konijn)
Door de antilichamen te complexeren kan er een enzym aangevoegd worden (bijv. peroxidase) waarmee je kunt kleuren.
Het aflezen kan dmv apparaten of gewoon op het oog.

#3

Hovinsj1

    Hovinsj1


  • >100 berichten
  • 125 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 oktober 2006 - 13:33

mag Duits ook?

http://de.wikipedia....ki/Western-Blot

Blotten hoeft niet perse alleen van SDS gelen. Natieve gels, IEF gels en 2D gels kunnen ook geblot worden. Nitrocellulose wordt veel gebruikt, maar PVDF nog meer (bind sterker eiwitten). Meestal wordt elektrisch geblot, maar het kan ook passief, simpel door diffusie.
Tegenwoordig kun je ook je primaire Antilichamen direkt labelen met een fluorescente probe (Cydyes) en direkt detekteren, maar de detektie met een tweede antichaam is nog steeds de meest gevoelige methode (inderdaad door peroxidase reaktie of alweer fluorescente labeling).


Towbin, H. et al. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. 76, 4350-4354. PMID 388439 PMC (freier Volltextzugriff).



sjouke

Veranderd door Hovinsj1, 13 oktober 2006 - 13:34


#4

Broekhem

    Broekhem


  • >100 berichten
  • 102 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 13 oktober 2006 - 18:13

Oke, maar bij het blotten bijv. dan maak je een "sandwich":
Ik doe dat op de volgende manier:
- Sponsje
- Whatman GB005
- Gel
- Membraan.
- Whatman GB005.
- Eventueel weer spons.

Maar waarvoor dienen deze spullen, de gel en membraan snap ik wel, maar wat is nou het nut van het sponsje en whatman papier.

#5

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 13 oktober 2006 - 19:08

Ik dacht en denk nog steeds dat het is om je gel en membraam onder gelijkmatige druk tegen elkaar te houden.
Ik heb het nog nooit zonder sponsjes geprobeerd maar als je voorzichtig bent zal het ook wel gaan.

#6

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 oktober 2006 - 19:16

BLotpapier neemt veel buffer op dit gebruik je om een constante stroom te laten lopen door je gel en membraam. Hierdoor blijven je membraam en gel vochtig wat zeer belangrijk is.

#7

Broekhem

    Broekhem


  • >100 berichten
  • 102 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 14 oktober 2006 - 10:27

Thnx voor jullie antwoorden, nu is me dat gedeelte i.i.g. al wat duidelijker.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures