Springen naar inhoud

Aantonen van de G6DPH -activiteit


  • Log in om te kunnen reageren

#1

renee_overbeek

    renee_overbeek


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 15 oktober 2006 - 16:17

Hallo,

Nou wij moeten voor ons Tutor groepje opdrachten maken. Nu is er een opdracht bij waarmee de activiteit van G6PDH (glucose-6-fosfaatdehydrogenase) moet worden aangetoond. De oprdacht is om een reactiemengsel samen te stellen waarmee dit spectrofotometrisch te bepalen is. En op basis van de spectrale eigenschappen van NADP+ en NADPH moeten we aangeven waar de excinctieveradering bij de omzetting van glucose-6-fosfaat in 6-fosfogluconaat aan moet worden toegschreven.

Dit is de reactie die optreedt
D-glucose-6-fosfaat + G6PDH/NAD+ <--> D-6-fosfogluconaat + G6PDH/NADH + H+

Wij denken dat er een mengsel moet komen dat reageert met G6PDH waardoor en bv een kleur onstaat en het zo te meten is. Maar wij zouden dus echt niet weten wat voor een mengsel dit moet zijn. Zouden jullie ons hierbij kunnen helpen?

Stukje informatie:

Een man van mediterrane herkomst, die dol is op tuinbonen, voelt zich na consumptie van deze bonen vaak loom en moe. Na een bezoek aan de huisarts moet een bloedonderzoek uitwijzen of deze man mogelijk bloedarmoede heeft als gevolg van een verhoogde gevoeligheid voor oxidatieve stress. Dit zou het gevolg kunnen zijn van de consumptie van deze bonen. De eerder vermelde symptomen zouden kunnen wijzen op een Glucose-6-fosfaatdehydrogenase deficiŽntie.

Glucose-6-fosfaatdehydrogenase(G6PDH) katalyseert de eerste stap van de pentose-fosfaat (PP)-route (oude benaming hexose-monofosfaat shunt). Hierbij wordt onder reductie van NADP+ tot NADPH, glucose-6-fosfaat omgezet in 6-fosfoglucono-δ-lacton (6-fosfogluconaat). Voor rode bloedcellen, erytrocyten, is deze route cq shunt van belang voor het genereren van reducerend vermogen. Wanneer hier niet aan voldaan is, bv in geval van G6PDH-deficiŽntie, is de kans groot dat de betreffende patiŽnt bloedarmoede ontwikkelt. Van belang is om in dit geval de activiteit van dit enzym vast te stellen.

De activiteit van dit enzym kan spectrofotometrisch worden bepaald. Hierbij wordt de extinctieverandering vastgesteld bij 340 nm als gevolg van de omzetting van NADP+ in NADPH.

Bepaal de samenstelling van het reactiemengsel waarmee de activiteit van G6PDH kan worden vastgesteld. Met welke factoren moet rekening worden gehouden bij de samenstelling van dit mengsel?

Onze leraar vertelde ons er dit bij:
Ik zou de reductie van NAD+ tot NADH spectrofotometrisch volgen door middel van extinctiemetingen bij 340 nm (NAD+ absorbeert bij deze golflengte niet) De molaire extinctie coefficient van NADH bedraagt bij deze lambda ongeveer: 6220 L.mol-1.cm-1.

Maar hier werden we ook niet veel wijzer van?

Alvast Bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Beryllium

    Beryllium


  • >5k berichten
  • 6314 berichten
  • Minicursusauteur

Geplaatst op 15 oktober 2006 - 21:34

Ik kan je niet zozeer helpen met de achtergrond van de reacties die je geeft, aangezien dit niet mijn expertise is.

Maar met het speectrometrische kan ik je wel helpen. Ik hoop dat ik je probleem goed heb begrepen.

Je weet, dat absorptie concentratie-gerelateerd is.
Ook weet je, dat 1 van je 2 analiete wel en de ander niet absorbeert bij 340 nm.
Ik denk, dat je door middel van een continu-absorptiemeting de omzetting van NADP+ in NADPH kan bepalen. Je kijkt naar de verandering in absortptie per tijdseenheid.
Door een stel standaardoplossingen te maken kan je neem ik aan al wijzer worden over de snelheid waarmee zo'n omzetting plaats vindt.
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

#3

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 15 oktober 2006 - 21:48

Een enzymreactie met hexokinase, ik heb er even een link bijgezocht.

http://doks.khk.be/e...0fb067018f9006c





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures