Springen naar inhoud

micropipet


  • Log in om te kunnen reageren

#1

sophietje_CF

    sophietje_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 12 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 oktober 2006 - 11:17

Kan iemand mij vertellen of het mogelijk is om d.m.v. een micropipet bepaalde eiwitten/enzymen uit organellen in een eucaryotische cel te halen??

Ik hoop dat iemand het weet.......... :oops:

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 oktober 2006 - 11:33

Ik werk zelf wel eens met microinjecties van peptiden in cellen, dit is al een zeer lastige klus. Hoe je precies eiwitten uit je organellen isoleerd weet ik niet, het lijkt mij makkelijker om ze op grote schaal te zuiveren.
Je hebt hier een hele fijne naald voor nodig, je moet hierbij zeer precies werken. Of dit zomaar gaat weet ik niet, bij ons passen ze het in ieder geval niet toe.

Wat wil je met deze enzymen/eiwtten gaan doen? Je hebt maar een hele kleine hoeveelheid als je ze zou isoleren.
Met DNA is het twns wel mogelijk, maar volgens mij is dat het uiterste.

Veranderd door Roy van Heesbeen, 19 oktober 2006 - 11:36


#3

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 oktober 2006 - 07:50

Het lijkt mij ook makkelijker om deze eiwitten/enzymen te isoleren op grote schaal. Ik zie het nut er ook niet zo van om dit uit een cel te halen. Als je wilt bepalen wat voor een eiwitten dan wel enzymen dit zijn kun je dit beter op DNA niveau doen. Tevens zou je eiwitten kunnen labellen, maar dan moet je wel de cellen ultradun snijden.

MvG Ron

#4

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 oktober 2006 - 10:21

Als je wilt bepalen wat voor een eiwitten dan wel enzymen dit zijn kun je dit beter op DNA niveau doen.

Wat bedoel je hiermee? Dat je vanuit een DNA sequence het aantal mogelijke eiwitten bepaalt?

#5

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 oktober 2006 - 11:43

Inderdaad. Als je de genen kunt achterhalen in bepaalde organellen kun je ook de eiwitten achterhalen. Maar volgens mij is dat niet zo makkelijk. Of zie ik dat nou verkeerd.

MvG Ron

#6

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 oktober 2006 - 12:21

Ok dit is mijn idee over deze methode. Het DNA bevat inderdaad de informatie benodigt voor de synthese van alle eiwitten. Maargoed als dit voldoende was dan was niemand bezig met transcriptomics en proteomics, omdat alle informatie toch al in het DNA zit. Ter vergelijk, er zijn ongeveer 30.000 genen in een mens, maar men schat 300.000 proteinen. Dit komt o.a. door alternative splicing, post translational modifications, protein-protein complexes en noem ze allemaal maar op. Wil je een compleet beeld krijgen van wat er dus allemaal in een cel gebeurd zul je dus echt op eiwit niveau moeten gaan meten.

Bij de analyze van eiwitten met behulp van massa spectrometrie worden de resultaten trouwens altijd wel tegen een DNA (Genome) voorspelde protein database gezocht. Maargoed er is dus behoorlijk wat meer.

Volgens de klassieke manier van denken waarbij men dacht dat wanneer men de blueprint van een cel had achterhaald de rest zo voorspelt kon worden is dus een beetje achterhaald. Cellen zijn toch heel wat dynamischer als in eerste instantie werd gedacht, en de absentie, presentie en concentratie van proteines speelt hierbij een essentiele rol

Edit: maar je hebt gelijk dat bij een enkele cel je meer zal vinden op DNA niveau, omdat je daar de PCR methode kunt toepassen om je DNA te amplificeren, iets wat je niet toe kunt passen op eiwitten. Uit 1 cel haal je zo weinig eiwitten dat ik bang ben dat je het niet eens zult kunnen aantonen met de meest gevoelige detectie methoden.

Veranderd door Napoleon1981, 20 oktober 2006 - 12:25


#7

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 oktober 2006 - 13:13

In ieder geval: met een micropipet eiwitten isoleren is onmogelijk.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures