Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 6
Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Hoe kunnen de cholesterol spiegels spectrofotometrisch worden gemeten?
Ik heb al veel gezocht, en in eerste instantie dacht ik dat dit met NMR kon. (Nucleair Magnetische Resonantie) Maar, tijdens mijn verdere zoektoch naar informatie over NMR kwam ik zelfs artikelen tegen, die beweerden dat NMR bijna niet meer bestond, en dat er allerlei haken en ogen aan deze techniek zaten.
Vervolgens bedacht een klasgenoot, cholesterol methyleren, en dat spectrofotometrisch meten. Maar een goede uitwerking hiervan, konden wij niet vinden.
Kan iemand asjeblieft helpen?
<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>
<div class='postcolor'>
Ik heb al veel gezocht, en in eerste instantie dacht ik dat dit met NMR kon. (Nucleair Magnetische Resonantie) Maar, tijdens mijn verdere zoektoch naar informatie over NMR kwam ik zelfs artikelen tegen, die beweerden dat NMR bijna niet meer bestond, en dat er allerlei haken en ogen aan deze techniek zaten.
Vervolgens bedacht een klasgenoot, cholesterol methyleren, en dat spectrofotometrisch meten. Maar een goede uitwerking hiervan, konden wij niet vinden.
Kan iemand asjeblieft helpen?
<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>
<div class='postcolor'>
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Cholesterol is meer manieren spectrofotometrisch te meten, de meest gangbare is een enzymmatische en de ander is een chemische techniek identiek aan de referentie techniek van het WHO.
Ik heb nu de preciese voorschriften niet bij de hand, maar als je wilt kan ik ze voor je opzoeken.
foutje hersteld
Ik heb nu de preciese voorschriften niet bij de hand, maar als je wilt kan ik ze voor je opzoeken.
foutje hersteld
-
- Berichten: 6
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Als je dat zou willen? Je zou me super helpen! Alvast heel erg bedankt!
<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>
<div class='postcolor'>
<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>
<div class='postcolor'>
-
- Berichten: 2.399
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
NMR is niet erg kwantitatief, soms kan het wel zo gebruikt worden, maar in dit geval niet. Monster is te complex.
- Berichten: 2.953
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
In welke artikelen werd dit beweerd dan? Het is dè techniek voor struktuuropheldering, kwalitatieve en semi-kwantitatieve analyse binnen de organische chemie.Maar, tijdens mijn verdere zoektoch naar informatie over NMR kwam ik zelfs artikelen tegen, die beweerden dat NMR bijna niet meer bestond, en dat er allerlei haken en ogen aan deze techniek zaten.
Overigens is NMR geen spectrofotometrische techniek, maar een spectroscopische techniek.
-
- Berichten: 6
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Ik kan het artikel zo gauw niet vinden. Maar er stonden dingen als dat het een achterhaalde techniek was, en 'slechts' een voorloper op de MRI.
Enfin, enzymatisch meten. Als ik het geod begrijp, zou het dan ong. in een versimpelde versie zo gaan:
Je voegt cholesterol + enzym samen. (welk enzym? Uit de biosynthese van Cholesterol?). Vervolgens meet je om de zoveel min in een spectrofotometer (wavelength?). Dan zet je dit uit tegen een ijklijn (van cholesterol?) en dan kan het cholesterol niveau met de formule berekend worden, die uit de ijklijn komt?
Enfin, enzymatisch meten. Als ik het geod begrijp, zou het dan ong. in een versimpelde versie zo gaan:
Je voegt cholesterol + enzym samen. (welk enzym? Uit de biosynthese van Cholesterol?). Vervolgens meet je om de zoveel min in een spectrofotometer (wavelength?). Dan zet je dit uit tegen een ijklijn (van cholesterol?) en dan kan het cholesterol niveau met de formule berekend worden, die uit de ijklijn komt?
- Berichten: 2.953
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Ik kan het artikel zo gauw niet vinden. Maar er stonden dingen als dat het een achterhaalde techniek was, en 'slechts' een voorloper op de MRI.
Nou ja. Dat slaat echt nergens op. NMR is ongeveer net zo achterhaald als HPLC (niet dus)
Mocht je het artikel nog vinden dan zou ik het ook graag willen lezen.
- Berichten: 6.314
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Bovendien is MRI gewoon een NMR-techniek. Er wordt gezegd dat de medische wereld de afkorting MRI gebruikt omdat NMR vanwege het nuclear een negatieve klank zou hebben, ook al heeft het niks maar dan ook niks met radioactiviteit te maken...
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
In de referentietechniek van het CDC wordt na verzeping van de cholesterolesters met alcoholische KOH oplossing het cholesterol m.b.v hexaan uit het serum geextraheerd. Na droogdampen wordt op het residu de Liebermann-Burchard reactie toegepast.
Enzymatische colorimetrische bepaling (als commerciele kits verkrijgbaar)
cholesterolesters + H2O ----Cholesterolesterase---> cholesterol + RCOOH
Cholesterol + O2 ---Cholesteroloxidase--> choles-4-en-3-one + H2O2
2 H2O2 + 4-aminophenazone + phenol --peroxidase-->4-(p-benzoquinone-monoimino)-phenazone + 4 H2O
aflezen bij 505 nm
Een oud voorschrift voor de bepaling van cholesterol
Standaard cholesterol: 96,5 mg cholesterol/100 ml ijsazijn (2,5 mmol/l)
De volgende buizen pipetteren:
Blanco 0.20 ml H2O met 0,50 ml ijsazijn
Standaard 0.20 ml H2O met 0,50 ml ijsazijn
Monster 0.20 ml serum met 0.50 ml ijsazijn
Vanaf nu alle buizen hetzelfde behandelen.
5 ml azijnzuuranhydride toevoegen
goed mengen, 10 minuten laten staan en cetrifugeren
Pipetteer in buizen 3,0 ml centrifugaat.
1 ml para-tolueen sulfonzuur toevoegen, goed mengen en 30 minuten laten staan
0,4 ml H2SO4 (sm 1,84 g/ml) toevoegen, goed mengen en 20 minuten laten staan.
aflezen tegen de blanco bij 550 nm
Enzymatische colorimetrische bepaling (als commerciele kits verkrijgbaar)
cholesterolesters + H2O ----Cholesterolesterase---> cholesterol + RCOOH
Cholesterol + O2 ---Cholesteroloxidase--> choles-4-en-3-one + H2O2
2 H2O2 + 4-aminophenazone + phenol --peroxidase-->4-(p-benzoquinone-monoimino)-phenazone + 4 H2O
aflezen bij 505 nm
Een oud voorschrift voor de bepaling van cholesterol
Standaard cholesterol: 96,5 mg cholesterol/100 ml ijsazijn (2,5 mmol/l)
De volgende buizen pipetteren:
Blanco 0.20 ml H2O met 0,50 ml ijsazijn
Standaard 0.20 ml H2O met 0,50 ml ijsazijn
Monster 0.20 ml serum met 0.50 ml ijsazijn
Vanaf nu alle buizen hetzelfde behandelen.
5 ml azijnzuuranhydride toevoegen
goed mengen, 10 minuten laten staan en cetrifugeren
Pipetteer in buizen 3,0 ml centrifugaat.
1 ml para-tolueen sulfonzuur toevoegen, goed mengen en 30 minuten laten staan
0,4 ml H2SO4 (sm 1,84 g/ml) toevoegen, goed mengen en 20 minuten laten staan.
aflezen tegen de blanco bij 550 nm
-
- Berichten: 6
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Heel erg bedankt voor je hulp! Super! [!]
-
- Berichten: 14
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Moet bij de standaard oplossing het water niet worden vervangen door de cholesterol oplossing anders heb je 2 blanco's?
Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren of 10 minuten centrifugeren en bij hoeveel rpm?
Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan?
alvast bedankt
Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren of 10 minuten centrifugeren en bij hoeveel rpm?
Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan?
alvast bedankt
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Moet bij de standaard oplossing het water niet worden vervangen door de cholesterol oplossing anders heb je 2 blanco's? Klopt
Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren Ja
Centrifugeren bij hoeveel rpm? De standaard centrifuge voor afdraaien van bloed werd gebruikt ca 1500 G en 10 minuten zal genoeg zijn.
Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan? Kamertemperatuur
Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren Ja
Centrifugeren bij hoeveel rpm? De standaard centrifuge voor afdraaien van bloed werd gebruikt ca 1500 G en 10 minuten zal genoeg zijn.
Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan? Kamertemperatuur
-
- Berichten: 14
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
heel erg bedankt, maar heb je misschien ook nog een tip waar ik het principe van dit experiment kan vinden? :-k
Re: Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.
Zover ik het weet bindt cholesterol direct aan paratolueensulfonzuur onder vorming van een groengekleurde verbinding.
Als je wilt uitzoeken hoe het precies werkt zul denk ik in een bibliotheek moeten zoeken in boeken van ongeveer halverwege 20e eeuw.
Als je wilt uitzoeken hoe het precies werkt zul denk ik in een bibliotheek moeten zoeken in boeken van ongeveer halverwege 20e eeuw.