Restrictie-enzym voor telomeren

Gerard

We mogen voor ons proefje tumorcellen gebruiken

Ik neem aan dat je cellen in een kweekmedium zitten en als je dit niet ververst zullen de cellen in een paar dagen de hongerdood sterven.

De opzet is om de celdeling te remmen is het niet mogelijk het medium zo te verarmen dat de cellen niet meer delen?

Roy van Heesbeen

Tumor cellen (GGO's) mogen naar mijn idee niet gekweekt worden op middelbare scholen, hiervoor zijn diverse certificaten nodig en ik neem aan dat er op jullie school geen LAF-kasten aanwezig zijn om veilig te werken. Hoewel het gevaar klein is, lijkt me het niet verstandig om hier zonder enig celkweek ervaring mee te werken. Je moet je eerst erin verdiepen hoe je met deze cellen omgaat e.d.

Naar mijn idee is jullie profielwerkstuk te hoog gegrepen. Je kan beter een soort van review schrijven over huidige cytostatic, mogelijke cytostatica en wat er in de toekomst voor nieuwe plannen zijn.

Hierbij kun je als praktijk deel op een uni. of HLO een middag meelopen en kijken hoe kankercellen worden gekweekt en worden getest. Eventueel kun je zelf een klein proefje uitvoeren en kijken naar celdood of iets dergelijks.

Wetenschappers zijn er nog vollop onderzoek aan het doen naar telomeren, waarover nog steeds maar weinig bekend is, dus het wordt lastig om hiervoor als scholier een mogelijk anti-tumor middel tegen te ontwerpen.

Eka

Nee je hebt helemaal gelijk Roy, daar is onze school trouwens veel te arm voor.

We weten heel goed waar we mee bezig zijn, we voeren onze proef uit op de Univ. van Utrecht. Daar zijn we al langsgeweest om te zien hoe het allemaal werkt en om te bespreken welke mogelijkheden er zijn mbt tot ons onderwerp. We zijn nu bezig met het ontwerpen van het proefje.

Dat 'review' idee leek ons nogal droog, dan zijn we niet echt met onderzoek bezig, meer een samenvatting aan het maken van reeds bekende informatie. Dat zou niet eens mogen omdat we ook verplicht zijn iets praktisch te doen.

Maarja een proef met echte (tumor)cellen hielden we niet voor mogelijk, dus zijn we naar een alternatief gaan zoeken. Toen hadden we een proef met colchicine en tuinboonworteltjes (die groeien snel) bedacht. Niet erg spectaculair, maar het had wel iets te maken met ons onderwerp. Maar zelfs dát kon niet bij ons op school. Toen kwamen we dus bij de Univ. van Utrecht..

Bedankt voor je tips, maar we hebben dus al 2 dagen meegelopen in laboratoria

(Utrecht dus en het angiogeneselab van Univ. van Maastricht)

Te hoog gegrepen wil ik het niet noemen, eerder uitdagend.

Eka

maarehm.. liever niet verhitten dus want anders heeft t weinig met ons onderwerp te maken, dus we willen wel een stofje toevoegen waardoor de deling wordt geremd.

Weet iemand iets over aphidicoline?

Roy van Heesbeen

Ik ken het zelf niet maar het kan o.a. apoptose induceren. Daarnaast remt het zeer specifiek DNA polymerases.

Het wordt wel eens als anti viraal en bacteriologisch middel gebruikt.

Eka

hoe werkt het tegen? is het eensoort vervangingssubstraat?

Roy van Heesbeen

Het zal wel inwerken op het actieve centrum van de polymerase, hierdoor is het niet meer mogelijk om nieuwe nucleotiden op aan de nieuwe DNA streng te plaatsen. Hoe het inwerkt op apoptose weet ik niet, maar het kan te maken hebben met de deregulatie van de polymerase waardoor er geen anti-apoptose (IAP's) eiwitten worden aangemaakt.

ALs je echt gedetailleerde info wilt moet je eens zoeken op Pupmed van NCBI.

Roy van Heesbeen

Als je weer op de universiteit komt zoek dan daar op een computer via PupMed naar dit artikel:

Control of cell division by aphidicolin without adverse effects upon resting cells.

Dit is een goede review over deze stof.

Eka

hoe zouden we het effect van dit stofje zo goed mogelijk kunnen meten, iemand?

We dachten zelf chromosomen zichtbaar maken mbv fluorescentie, en dan de telomeren een ander kleurtje zodat we kunenn zien of de chromosomen breken (of gebeurt dat niet bij apoptose?)

Roy van Heesbeen

Denk er wel aan dat apoptose een langzaam proces is.

Ik heb hier nog wel wat goede filmpjes liggen die ik overnacht gemaakt hebt.

Apoptose duurt zeker een paar uur, maar dat is per cellijn verschillend.

Je kan wel duidelijk zien dat de cel weer rond wordt en loslaat van de bodem.

Wat je wilt toepassen met fluorescentie is een zeer lastig proces. Je moet hiervoor de cellen transfecteren met fusie-eiwitten die op het chromosoom binden.

Wij hebben hier wel fluorescente histonen liggen.

Je kan denk ik het beste om de 10 minuten een foto maken en de cel heel de dag volgen. Denk hierbij wel aan de temperatuur, CO2 e.d.

biochemiefreak

Dit is op zich best lastig fluorescende labels koppelen aan zo'n klein specifiek stukje DNA. Ik ben er ook niet helemaal in thuis.

Maar met behulp van een CLSM kun je wel goed fluorescentie volgen.

Maakt z stacks met foto's de samen een 3d beeld kunnen vormen.

MvG Ron

Eka

Hmm.. ik heb er niet aan gedacht dat het waarschijnlijk nooit de mitose haalt dus dat de chromosomen niet eens te zien zijn..

Hoe zouden we toch nog kunnen aantonen dat het stofje de deling remt?

Oja, heb je die filmpjes heel toevallig nog?

Roy van Heesbeen

Die filmpjes zijn ontzettend groot dus die kan ik niet zo sturen,

chromosomen zijn met een gewone microscoop niet makkelijk te zien, phase constrast op een degelijke vergroting werkt wel goed.

http://www.cellsalive.com/apop.htm

hier zie je btw wat foto's van apoptose.

Let op de vesicles met eiwitten, DNA enz. die uit de cel lopen.

Bij necrose zie je dit niet, hierbij "ontploft" de cel als het ware.

Eka

Ander kort vraagje, we dwalen nu wel een beetje af maar ik vind het zonde om hiervoor een heel nieuw topic te openen:

Waar staat Pi voor in deze reactie:

PPi --> Pi + Pi

PPi is pyrofosfaat dacht ik, dat vrijkomt als de nucleotiden aan de DNA streng wordt verbonden.

En waarom maakt deze reactie de reactie van daarvoor irreversible?

O en wat is deze reactie in molecuul/structuurformules?

Roy van Heesbeen

De P staat voor de fosfaatgroepen die vrijkomen bij het polymeriseren van de DNA streng.

Losse nucleotiden met 3 fosfaatgroepen worden door de polymerase gekoppeld aan het DNA. Hierbij vallen er 2 fosfaatgroepen af die de energie leveren.

Hier zie je de reactie redelijk duidelijk uitgelegd.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren

Re: Restrictie-enzym voor telomeren