Springen naar inhoud

kolomkeuze bij koolhydraatbepaling


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Rickkie

    Rickkie


  • >100 berichten
  • 242 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 09:03

Dag O forumleden,

ik was bezig met een suikerbepaling (glucose, fructose, sucrose, maltose en lactose) en wilde dit met HPLC doen. Nou heb ik net een run gedaan met 80-20 acetonitril-h2O en een microBondapak/C18 kolom, maar ik krijg 1 piek onvertraagd (1,5 min bij flow = 1 ml/min) en verder niets. Detectoren RI en PDAD.
Ik neem aan dat het aan de kolom ligt, maar welke wordt hier dan normaal voor gebruikt? Ik heb nog een Terra RP18 liggen en Symmetry C8 en C18. Heeft iemand ervaring met deze kolommen? Mbt sukerbepaling dan :oops:
Alvast bedankt

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 09:22

Probeer eerst maar eens een 20-80 ACN-H2O

#3

drune134

    drune134


  • >250 berichten
  • 873 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 09:30

We gebruiken de volhende kolommen:

Kolom: Merck"Hibar" RT 300-7,8 Polyspher (art.nr.1.51278.0001) CHPB Voorkolom: Merck Polyspher (art. nr. 1.051279.0001).

Eluens: mill-Q gezuiverd water.
Flow 0.2 ml/min

Enkele Rt:
Saccharose 16.32
Maltose 17.25
Lactose 18.01
Glucose 19.67
Galactose 22.80
Fructose 26.19


succes

#4

Rickkie

    Rickkie


  • >100 berichten
  • 242 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 09:36

Aha maar die Hybar heeft toch ook een C8 stat.fase? Dat is de enige die ik op internet zie staan iig :oops:
Jullie geven aan dat het percentage water omhoog moet, maar volgens de voorschriften die ik gevonden heb gebruiken ze allemaal 75-25 of 80-20 AcCN-H2O... Maar ik ga kijken of die kolom waar ik mee bewig ben het aankan en dan probeer ik het wel. Bedankt! Je hoort wel of het gelukt is 8-[

#5

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 10:03

Nee die Hybar is een polyspher...maar dat is geen C8.

#6

Rickkie

    Rickkie


  • >100 berichten
  • 242 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 10:52

Ok ik heb nu in ieder geval de flow op 0,5 staan, en ik krijg al verschillende "toppen" ... Hoopvol ;)
Heb ook een 20-80 % AcCN klaarstaan, maar dan moet ik eerst weer het systeem doorspoelen en een dag wachten totdat de RI weer geaclimatiseerd is :P en ik wilde eigenlijk vandaag nog meten ;) ...
Is het aan te raden nu direct dat andere eluens erin te gooien, of zal ik het eerst proberen met een 50-50 bijvoorbeeld? Veel slechter kan de scheiding niet worden maar toch... Voor de volledigheid: piek die eruit komt Rt= 2,2 min (euh ongeveer he hij is nogal breed ivm eerdergenoemde meerdere toppen Geplaatste afbeelding )
Gewoon even bij de berm: Met een RI heb je toch niet te maken met een spectrum 8-[ volgens mijn begeleider wel namelijk maar hij is niet zo thuis in de HPLC :oops: Ik dacht dat het gewoon een bindel was die door 2 celletjes schijnt, 1 met online eluens+monster de andere met gewoon eluens...
Maar goed ik kan het mis hebben...

#7

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 11:58

Juist omdat je geen scheiding hebt, zou ik het rigeus aan pakken. Lukt het bij 20-80 is het mooi. Heb je te veel scheiding bij 20-80 dan kan je altijd nog terug. Heb je geen scheiding bij 20-80 moet je naar een andere kolom.

Bij 50-50 kan je nog steeds geen scheiding hebben, maar je weet nog niets. Je moet dan ook nog 20-80 proberen, om het effect van eluens uit te flakken.

Bij een RI heb geen spectrum, bij een DAD wel.

EDIT: juist door de meerdere toppen in 1 piek denk ik dat je geen goede keuze eluens hebt.

Misschien is het een tip om eens de catalogus van bv, phenomenex te pakken en kijken hoe daar suikers worden gescheiden

Veranderd door JeroenCV, 09 februari 2007 - 12:00


#8

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 14:39

Precies modifier moet mega omlaag. Suikers zijn super polaire moleculen, dus schieten door de kolom op hoge modifier concentraties.

#9

Boanerges

    Boanerges


  • >250 berichten
  • 274 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 18:31

Hier http://www.brechbueh.../docs/zhrzx.pdf
staan van Phenomenex diverse kolommen die geschikt zijn voor suikers. Zelf heb ik veel hulp gehad aan de tabel onderaan in het kiezen van de kolom. Ik heb nu een kolom de RPM Pb2+ in combinatie met een RI detector. Voornamelijk gebruik ik hem voor lactose met als interne standaard melezitose.

#10

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 februari 2007 - 18:58

Welk eluens gebruik je hierbij Boanerges?

#11

Boanerges

    Boanerges


  • >250 berichten
  • 274 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 februari 2007 - 11:44

Ultra puur water dat nog een keer extra ontgast is, voordat het verpompt wordt zit er nog een extra filter tussen om eventuele verontreiniging nog tegen te gaan. Een lekker goedkoop eluens, en de resultaten tot nu toe zijn zeer goed.

Voor de kolom zelf zit nog een cartrigde om de kolom zelf te beschermen.

#12

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 februari 2007 - 07:59

Ok, dank je voor je info.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures