Springen naar inhoud

Vetzuur analyse


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Rickkie

    Rickkie


  • >100 berichten
  • 242 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 februari 2007 - 14:34

Dag!
Ik ben bezig met een analyse van vet in voedsel (als ik even niet op het chill-out forum zit 8-[ ). Mijn idee is: een standaardreeks van bekende hoeveelheden FAME(fatty acid methyl ester)-mix + C17 interne standaard (als methyl ester, die ik nog niet heb) injecteren. Dan weet ik de respons van de individuele vetzuren, de retentietijden en de respons van mijn interne standaard.
Nu heb ik meerdere vragen:

Is het nodig speciaal C17 FAME te kopen? Ik heb al C17 vetzuur, en de FAME standaarden die ik heb komen van sigma-aldrich, uit zo'n ampul (100 mg in totaal). Ik heb het idee dat ik het gebruik van de C17 FAME kan ontduiken, maar weet niet precies hoe.
Niet door mijn standaard te veresteren, dan moet ik het namelijk gaan zuiveren etcetc. Maar als de FAME-mix goed bekend is (het is PRECIES 100 mg en de componenten worden gegeven in massa/massa percentages met een s van 0,001%), heb ik toch geen interne standaard nodig? Ik weet hoeveel ik heb ingewogen, en ik lees wat de counts per piek zijn. De interne standaard is dan toch overbodig?

Verder:
Bij het monster gooi ik een x aantal mg C17 vetzuur, dus niet als methylester, vervolgens extraheer ik de vetten, en (trans-)esterificeer ik ze (dus ook de C17) met TMSH en injecteer ik het goedje.
Omdat ik precies weet hoeveel C17 ik heb toegevoegd, kan ik berekenen wat het vet-verlies is door de TMSH verestering.
Dus hiervoor heb ik dan toch ook geen C17 FAME nodig?

Misschien zie ik iets over het hoofd, dat is dus de reden van deze posting.
Ik hoor het graag :oops:

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

jwmarinissen

    jwmarinissen


  • 0 - 25 berichten
  • 1 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 februari 2007 - 16:02

Hallo,

Er zijn verschillende methoden om te bepalen wat de concentraties van FAME's zijn in een monster. B.v. toepassing van additie-methode en dus ook gebruik van interne standaarden. Het laatste wordt bijna altijd gedaan omdat dit uiteindelijk nauwkeuriger resultaten oplevert bij FAME analyses.
Het blijft de vraag of de kleinere en grotere FAME's met dezelfde efficiency kunnen worden geextraheerd. Maar omdat de eigenschappen van de verschillende FAME's redelijk gelijk zijn, zal de invloed van de extractie en de derivatizering dezelfde zijn. De C17-FAME zal dan ook een goede maat zijn voor de andere FAME's. Je corrigeert met de I.S. methode voor fouten/afwijkingen die gemaakt worden in de extractie en derivatizering.

Wanneer je een analyse gaat doen van de FAME's geldt de volgende regel:
Hoe polairder de GC kolom, hoe beter en meer isomeren gescheiden kunnen worden. Een Wax kolom zal de FAME's al aardig kunnen scheiden, maar wanneer je cis/trans isomeren wil gaan scheiden, kies dan b.v. voor de CP-Select for FAME kolom of de nog polairdere CP-Sil 88 for FAME kolommen (Varian). De eerstgenoemde kan cis/trans isomeren scheiden en is een stabielere kolom (chemisch gebonden) vergeleken met de CP-Sil 88. Met deze laatste kunnen weer iets betere cis/trans scheidingen worden verkregen.

Veel succes!
Jan Willem.

#3

drune134

    drune134


  • >250 berichten
  • 873 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 februari 2007 - 21:53

Hoi rickkie

Ik denk dat je beter geen C17 als IS kunt gebruiken.
Ik begrijp dat je de vetzuursamenstelling wilt bepalen van het vet dat in voedsel zit. Je zult vaak zien, als je geen C17 als IS gebruikt, dat er sowieso C17 vetzuur aanwezig is in vet afkomstig uit voedsel.
Je kunt dan beter C13 gebruiken. Is te verkrijgen bij Sigma als methylester.

Verder wil je de IS gebruiken ter controle van je vetextractie?
Hoe ga je die vetextractie uitvoeren? Met de Weibull-methode is je vet niet bruikbaar om daarvan de vetzuursamenstelling te bepalen. Bij een sokshlett extractie is het de vraag of je al het vet uit je voedsel haalt, is ook afhankelijk van je extractiemiddel. In veel gevallen is hexaan geschikt maar wanneer je bv melk of melkprodukten hebt dan mis je een groot deel van je vet. Je moet dan de methode van Folch gebruiken (extractie met o.a. dichloormethaan of chloroform).

Ik weet niet of ik nu meer vragen voor je oproep maar ik denk dat je eerst een goede methode moet hebben voor je vetextractie. De omestering naar je vetzuur-methylesters en de GC bepaling kan alleen een goed resultaat geven wanneer je uit kunt gaan van het juiste vet.

suc6

#4

Rickkie

    Rickkie


  • >100 berichten
  • 242 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 maart 2007 - 08:11

Oh ik had begrepen dat C17 noujuist een hele goede I.S. zou zijn omdat het bijna nergens in voorkomt... (alleen in haarvet ofzo)
Ik doe inderdaad een soxhlet, maar ik ben nog aant kijken wat de grootste opbrengst heeft qua oplosmiddel (hexaan of petroleumether). Volgens jou (drune)
krijg ik met een soxhlet dus niet alle vet uit een melkmonster?
Heb je hier een reden voor?

#5

drune134

    drune134


  • >250 berichten
  • 873 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 06 maart 2007 - 08:37

Volgens jou (drune)
krijg ik met een soxhlet dus niet alle vet uit een melkmonster?
Heb je hier een reden voor?

Het vet in melk is omgeven door eiwitten. Hierdoor blijft het vet mooi 'verdeeld' in de melk. Wanneer melk zuur wordt, of wanneer je zuur toevoegt, komt het vet vrij. Daardoor zie je dat bij zure melk het vet letterliojk boven komt drijven.
Dit zie je ook bij melk die rechtstreeks van onder de koe komt. Laat je die staan dan komt daar ook vet boven drijven. Door een homogenisatie-proces wordt het vet verdeelt in heel kleine deeltjes waardoor het makkelijker 'gebonden' wordt door de eiwitten.
Bij een normale extractie met hexaan, petroleumether of apolair organisch middel mis je zo'n 15 - 25 % vet.
Wanneer je bv. IPA (isopropanol) toevoegt komt het vet vrij en krijg je een beter resultaat. bij een soxhlett werkt dit niet.
Het aanzuren van de melk kan ook maar dan wordt wel je vetzuursamenstelling gewijzigd.
Een officiŽle bepaling van vet in melk is de methode van Gerber. Hier wordt aan melk een aantal ml geconc. zwavelzuur en IPA toegevoegd zodat al het aanwezige vet vrij komt. Dit vet is dus niet geschikt voor bepalen van een vetzuursamenstelling omdat zuur gebruikt wordt.

Voor bepalen van het vetgehalte maken wij gebruik van een Accelerated Solvent Ectractor (ASE) van Dionex. Hier wordt het monster gemengd met een diatomacious aarde, gedroogd op een waterbad en geŽxtraheerd met een geschikt oplosmiddel (of mengsel). Voor melk en melkprodukten gebruiken wij petroleumether/aceton/IPA in een verhouding van 60/30/10.
Wanneer je geen ASE hebt zou je je monster kunnen mengen met diatomacious aarde, drogen op een waterbad, uitschudden met evt. bovenstaand extractiemiddel, filtreren en afdampen. Wat je overhoudt moet je vet zijn.

ik hoop dat je hier iets aan hebt. Vragen? Laat maar weten.

suc6





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures