Springen naar inhoud

[scheikunde] Berekening specifieke activiteit Proteasen


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 10:25

Hallo.

Ik heb een proef gedaan waarbij ik de specifieke activiteit van protease heb gemeten..

Ik heb 3 protease preparaten van 0,1 U/ml 0,2 U/ml en 0,3 U/ml. Op het etiket staat 6,9 U/mg....
Ik heb 10 mg ingwogen en opgelost in 230 ml Tris-buffer= 0,3 U/ml. Hieruit heb ik 20 ml pepipetteerd en aangevuld tot 30 ml met Trisbuffer= 0,2 U/ml. En 10 ml uit 230 ml en dat ook aangevuld met Trisbuffer= 0,1 U/ml...

Dit heeft na het toevoegen van case´ne-oplossing (1g/100ml pH=9) 30 minuten ge´ncubeerd..
Ik heb de reactie gestopt met TCA-oplossing. Het neergeslagen eiwit heb ik met een vouw-filter eruit gehaald en ik heb de helder overgebleven oplossing gemeten bij een Extinctie van 280 nm... ik heb als referentie-oplossing tyrosine gebruikt...

Nu moet ik de specifieke activiteit van het protease-preparaaat als het aantal umol product dat met minuut door 1mg protease wordt omgezet...

Nu heeft mijn leraar wel het een en ander uitgelegt maar ik snap er niets van...
Wie kan mij hierbij helpen?????? :oops: 8-[

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

G.i.B.

    G.i.B.


  • >250 berichten
  • 387 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 13:05

Ik ken dit helemaal niet, dus ik kan alleen logisch meedenken.
Je hebt een aantal factoren die je mee moet nemen in je berekening.

Hoeveel ml van je 3 protease preparaten heb je gebruikt ?

Hoeveel van je caseine-oplossing heb je gebruikt ?

Je hebt 30 min geincubeerd en je moet je waarde per minuut hebben !

Hoe relateerd je referentie oplossing tov je gemeten extincties ?

Wat doet protease met caseine ?

Wat sla je neer met je TCA-oplossing ?

Kun je je berekening (wat je wel hebt) laten zien ??

#3

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 15:27

Hoeveel ml van je 3 protease preparaten heb je gebruikt ?
Ik heb 1,0ml van elk preparaat in een buis gedaan.

Hoeveel van je caseine-oplossing heb je gebruikt ?
Ik heb bij elke preparaat 5,0ml case´ne-opl. toegevoegd en dit heb ik 30 minuten ge´ncubeerd.

Wat doet protease met caseine ?
Case´ne start de reactie met protease.

Wat sla je neer met je TCA-oplossing ?
TCA denatureerd eiwitten. Slaat het niet gebruikte case´ne neer.

Kun je je berekening (wat je wel hebt) laten zien ??
Heb ik niet...

Hoe relateerd je referentie oplossing tov je gemeten extincties ?
Geen idee...


Waarden: Extinctie gemeten bij 280nm
Referentie-opl. tyrosine: 0.3794
0,1 U/ml : 0.2995
0,2 U/ml : 0.6194
0,3 U/ml : 0.8930

#4

G.i.B.

    G.i.B.


  • >250 berichten
  • 387 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 15:59

Case´ne start de reactie met protease.


Beetje vaag en niet correct, kijk eens op wikkipedia.

Hoe relateerd je referentie oplossing tov je gemeten extincties ?
Geen idee...


Je moet hier meer info over hebben, anders kan je geen berekening maken.
Je hebt nodig dat je waarde van 0.3794 overeenkomt met bv. x umol/ml
Kan je dit opzoeken of een medestudent bellen ?

0,1 U/ml : 0.2995
0,2 U/ml : 0.6194
0,3 U/ml : 0.8930


Je tweede waarde wijkt een beetje af (het is niet anders. Je moet het gemiddelde nemen)

#5

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 18:01

De referentieoplossing tyrosine met de gemeten waarde van 0.3794 is 5uml/ml...

#6

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 18:32

Nee ik zeg het verkeerd de referentie-opl. tyrosine met een gemeten waarde van 0.3794 is 5umol/ml....

#7

G.i.B.

    G.i.B.


  • >250 berichten
  • 387 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 maart 2007 - 18:40

1 : Als 0.3794 = 5 umol/ml, hoeveel is dan 0.2995 ,0.6194 en 0.8930 ??

2 : Wat is het mol gewicht van caseine ? Je bent begonnen met 5ml, 1gram/100ml, dit moet je omrekenen naar hoeveel mol per ml, om te bekijken met hoeveel je bent begonnen en hoeveel je nog hebt.

Je kan je bericht veranderen met de bewerk knop

Veranderd door G.i.B., 17 maart 2007 - 18:42


#8

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 18 maart 2007 - 19:32

(5*0.2995)/0.3794= 3.9 umol/ml voor 0,1 U/ml
(5*0.6194)/0.3794= 8.1 umol/ml voor 0,2 U/ml
(5*0.8930)/0.3794=11.8umol/ml voor 0,3 U/ml

Ik ben zo stom geweest om de molmassa van case´ne niet op te schrijven.. Dit moet ik nog opzoeken.
Ik heb van een aantal leerlingen begrepen dat er nog een aantal factoren meespelen wat betreft tyrosine in de case´ne.. Ik heb een website waar de aminozuurvolgorde op moet staan van case´ne maar ook dat is een spelt in een hooiberg zoeken....

#9

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 18 maart 2007 - 19:55

Bedankt dat je me wilt helpen..
Ik ben gewoon heel erg slecht met rekenen..
Helaas voor mijn leraar en dan ook voor mezelf.....

#10

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 18 maart 2007 - 21:40

alpha-s1 casein: molecular weight 23,000; 199 residues
alpha-s2 casein: molecular weight 25,000; 207 residues
beta casein: molecular weight 24,000; 209 residues
kappa casein: molecular weight 19,000; 169 residues.

Nu weet ik alleen niet welke ik moet gerbuiken dus ik ga morgen eerst op school het een en ander uitzoeken......


Laterzz......

#11

Tabitha

    Tabitha


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 18 maart 2007 - 21:54

alpha-s1 casein: molecular weight 23,000; 199 residues
alpha-s2 casein: molecular weight 25,000; 207 residues
beta casein: molecular weight 24,000; 209 residues
kappa casein: molecular weight 19,000; 169 residues.

Nu weet ik alleen niet welke ik moet gerbuiken dus ik ga morgen eerst op school het een en ander uitzoeken......


Laterzz......

#12

G.i.B.

    G.i.B.


  • >250 berichten
  • 387 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 maart 2007 - 22:08

0.1 = 3.947
0.2 = 8.163 (waarom heb je hier omlaag afgerond ??)(omdat je meetwaarde een beetje hoog lag ??)
0.3 = 11.769

Veranderd door G.i.B., 18 maart 2007 - 22:47






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures