Algemene VB vs Selectief medium

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 5

Algemene VB vs Selectief medium

Ik moet voor een klein onderzoek een proefopstelling uitwerken.

DOEL: Een kwantitatieve vergelijking tussen het aantal MRSA kolonies dat op een bloedplaat groeit en van dit zelfde staal kijken of er op een selectief media, MRSAID dezelfde kwantiteit groeit. (maw is het media niet te selectief waardoor een gering aantal kolonies niet zo worden opgemerkt: stel als er op de bloedplaat 200 kolonies groeien en op de MRSAID 20 kolonies, zou dit problemen kunnen opleveren --> 10 op de blp zou dan maar 1 meer zijn)

Mijn grote vraag hoe kun je ervoor zorgen dat je +/- weet als je bloedplaat ent dat er x aantal kolonies opstaan zodat ze nog telbaar zijn. Vertrekpunt zijn MRSA stammen massief geent op MuellerHintonAgar

Hopelijk verstaan jullie waar mijn probleem ligt en krijg ik een antwoord.

Gebruikersavatar
Berichten: 6.314

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Je bedoelt neem ik aan dat je wel kolonies krijgt maar niet zoveel dat ze niet meer als individueel te tellen zijn?

Zou je niet iets als een verdunning kunnen maken, dat je 1 'stock' maakt van MRSA vanaf je MH agar, en die doorverdunt? Van elke verdunning breng je dan bijvoorbeeld 1 microliter over op de bloedagar/MRSAID en plaat je uit. Dan kun je ten eerste zien welke verdunning goed is voor tellen en je kan tegelijkertijd de kolonies tellen.
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

Berichten: 27

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Als je een kolonie pakt heb je iedere maal een andere hoeveelheid waardoor je telkens veranderende uitslagen krijgt.

wat mij persoonlijk beter lijkt is dat je een cultuur ophoopt in een vloeibaar medium (BHI of NB). Wij gaan er hier van uit dat een 24 uurs cultuur ongeveer 1*10 tot de 9e kve/ml bevat. Vanhieruit kunt je een mooie verdunningsreeks maken. Als je spreidplaten hebt dan zou ik de 1*10 4e, 3e en 2e uitplaten. Dan heb je altijd wel een mooie telbare plaat.

Dat waren mijn 2 centjes.

groetjes, Martijn

Berichten: 5

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Misschien beetje domme vraag, maar als je schrijft: "een cultuur ophoopt in een vloeibaar medium " is dat onafhankelijk van de beginhoeveelheid? Of ik nu één MRSA kolonie neem van mijn plaat en in de bouillon laat overnachten of drie/vier kolonies?

Berichten: 21

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Als ik het goed heb is dit wel afhankelijk van de beginhoeveelheid. Als je begint met minder m.o's eindig je ook met minder m.o's.

Berichten: 27

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Sorrie voor mijn late reactie. De ophoping is onafhankelijk van de beginhoeveelheid. Een cultuur in een vloeibaar medium zal na een tijdje (24 uur) een evenwicht bereiken en niet meer toenemen. Meestal ligt dit punt op 1.000.000.000 kve/ml.

Als je daarna een verdunningsreeks maakt dan heb je op een gegeven moment een buis met een bepaalde hoeveelheid die telbaar is. Als je nu op de bloedplaat een bepaalde hoeveelheid pipetteerd en er groeien 200 kolonies en je pipetteerd uit dezelfde buis op de selectieve plaat en er groeien maar 100 kolonies dan weet je toch hoeveel er geremd worden.

Hopelijk is het zo duidelijk.

MVG, Martijn

Berichten: 5

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Afbeelding

Is dit dan te verklaren hiermee. Dat je in de stationaire fase zit, of is er een andere verklaring voor.

Berichten: 27

Re: Algemene VB vs Selectief medium

Dat klopt, na 24 uur zitten ze in de stationaire fase en zal het aantal gelijk blijven. Na een tijdje is het "eten" op en zullen er meer doodgaan dan bijkomen en dan daalt het aantal levende cellen.

De staionaire fase wil gewoon zeggen dat er net zoveel bijkomen als er doodgaan, dit komt vooral door ruimtegebrek. Als het voedsel opraakt dan zal het aantal pas afnemen.

mvg, biohazzard

Reageer