Springen naar inhoud

piekverbreding


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Loesje27

    Loesje27


  • >25 berichten
  • 68 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 maart 2007 - 20:43

Hallo,

ik heb een vraagje
normaal wordt mijn stof opgelost in 0.1 mol/l NaOH en dan doorverdund en opgelost / aangevuld met aangezuurde methanol. Wanneer ik dit injecteer op een HPLC met een mobiele fase van ammoniumacetaat pH9 en acetonitril (75:25) dan onstaat er een mooi chromatogram.

Wanneer ik dezelfde stof opgelos in 0.1 mol/l NH4OH en dit daarna doorverdun / aanvul met aangezuurde methanol.
Krijg ik piekverbreding te zien in mijn chromatogram. Komt dit door de NH4OH of is dit niet mogelijk??

alvast bedankt voor de moeite

groetjes Marloes

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

DrQuico

    DrQuico


  • >1k berichten
  • 2952 berichten
  • VIP

Geplaatst op 21 maart 2007 - 00:23

Is dit gebaseerd op één waarneming of is het reproduceerbaar? Het lijkt me vreemd wanneer het aan de ammonia ligt, je gebruikt immers ook een ammoniumacetaat-oplossing in je mobiele fase.

#3

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 00:45

Het komt door de methanol wanneer je RP chromatografie gebruikt. Je injecteert het sample in een sterker solvent dan je mobiele fase, waardoor je een soort korte gradient op je kolom krijgt. Probeer je monsters nooit te injecteren in iets met meer organisch dan je mobiele fase!

Probeer het nog eens en verdun je monsters gewoon in water :oops:

Veranderd door Napoleon1981, 21 maart 2007 - 04:48


#4

Loesje27

    Loesje27


  • >25 berichten
  • 68 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 10:45

Als het indd aan mijn methanol zou liggen, waarom krijg ik dan wel een mooi chromatogram als ik mijn stof in NaOH op los??

en de metingen zijn reproduceerbaar,
wat me wel opvalt is hoe hoger de concentratie is, des te scherper wordt de piek, maar dan nog gaat er een grote verbreding aan vooraf.

#5

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 16:09

Over welke stof gaat het? Welk is de retentietijd? (of beter nog: de retentiefactor)

Piekverbreding kan te maken hebben met buffercapaciteit of pH van de mobiele fase.

#6

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 16:25

Als het indd aan mijn methanol zou liggen, waarom krijg ik dan wel een mooi chromatogram als ik mijn stof in NaOH op los??

Ik zeg juist dat het aan de aanwezigheid van methanol ligt, en jij zegt nu, ja maar als ik het weg laat dan krijg ik een mooi chromatogram :oops:. Wat is je punt?

Nog maar een keer uitleggen:

Als je zegmaar 40% methanol in je sample hebt, en je hebt maar 25% methanol of ACN in je mobiele fase dan krijg je piekverbreding doordat je sample zich in een sterker solvent begeeft dan de mobiele fase.

Veranderd door Napoleon1981, 21 maart 2007 - 16:29


#7

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 16:26

Piekverbreding kan te maken hebben met buffercapaciteit of pH van de mobiele fase.

Over het algemeen toch niet hoor. Zeker niet bij deze basische pH's die toch al gebruikt worden.

#8

keyzplayer

    keyzplayer


  • >100 berichten
  • 115 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 16:46

Als ik het goed begrijp heb je 2 monsters geprikt die allebei evenveel aangezuurde methanol bevatten maar de ene is opgelost in 0.1 M NaOH en de andere in 0.1 M NH4OH.

Ik zou het in eerste instantie net als Jooken gaan zoeken in de pH of buffercapaciteit van de mobiele fase. Wat is de concentratie van de ammoniumacetaat in de pH 9 buffer?

#9

Loesje27

    Loesje27


  • >25 berichten
  • 68 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 maart 2007 - 17:18

Als ik het goed begrijp heb je 2 monsters geprikt die allebei evenveel aangezuurde methanol bevatten maar de ene is opgelost in 0.1 M NaOH en de andere in 0.1 M NH4OH.

Ik zou het in eerste instantie net als Jooken gaan zoeken in de pH of buffercapaciteit van de mobiele fase. Wat is de concentratie van de ammoniumacetaat in de pH 9 buffer?

de concentratie ammoniumacetaat is 10mM

en indd 1 monster is opgelost in 0.1 mol/l NaOH en dan doorverdund met aangezuurde methanol (methanol aangezuurd met azijnzuur) de totale verhouding is dan base: zuur 2:3
het andere monster is opgelost in 0.1mol/l NH4OH en dan ook aangezuurd in verhouding 2:3

mijn stof heeft een retentietijd van 7.5 minuut

#10

DrQuico

    DrQuico


  • >1k berichten
  • 2952 berichten
  • VIP

Geplaatst op 22 maart 2007 - 00:22

Als ik het goed heb is de concentratie azijnzuur in de methanol ook 0.1 M en verdun je je monster bij het aanzuren dus met een factor 2.5.
Je injecteert je monster dus samen met 40 mM NaOAc en 10 mM HOAc en je krijgt een smalle piek. En je injecteert je monster met 40 mM NH4OAc en 10 mM HOAc en je krijgt een brede piek. De pH van deze oplossingen zal verschillen en dit zijn vrij hoge concentraties in vergelijking met je buffer in het eluens (buffercapaciteit). Je zou kunnen proberen de monsterbereiding uit te voeren met lagere concentraties NaOH en azijnzuur.

#11

tabias

    tabias


  • >25 berichten
  • 32 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 22 maart 2007 - 22:29

wat ik zou proberen is om uw NH4OAc te verdunnen, het probleem hierdoor is wel dat je pH gaat zakken van de volledige oplossing. Door het grotere volume van NH4OAc tov NaOAc zal je een vertraging hebben van bepaalde stukken van uw eluens door ruimtelijke hinder in de kolom terwijl anderen een stuk minder hinder ondervinden.

kort: volgens mij zorgt ruimtelijke hinder voor een bredere piek door een grotere spreiding in de HPLC.
Dit is is niet gestaafd en komt niet uit een cursus natuurlijk maar dat zou ik zeggen op een examenvraag.

#12

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 24 maart 2007 - 05:22

Dat komt ook niet uit een boek, omdat simpel weg niet waar is. Ruimtelijke hinder, hoe kun je dat zeggen als je niet eens weet wat de porie grote is van de kolom. Trouwens waar staat ruimtelijke hinder in de Van deemter vergelijking of de knox verlijking?

#13

Loesje27

    Loesje27


  • >25 berichten
  • 68 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 maart 2007 - 11:21

Als ik het goed heb is de concentratie azijnzuur in de methanol ook 0.1 M en verdun je je monster bij het aanzuren dus met een factor 2.5.
Je injecteert je monster dus samen met 40 mM NaOAc en 10 mM HOAc en je krijgt een smalle piek. En je injecteert je monster met 40 mM NH4OAc en 10 mM HOAc en je krijgt een brede piek. De pH van deze oplossingen zal verschillen en dit zijn vrij hoge concentraties in vergelijking met je buffer in het eluens (buffercapaciteit). Je zou kunnen proberen de monsterbereiding uit te voeren met lagere concentraties NaOH en azijnzuur.

jah ik denkt dat de pH van 0,1 mol/l NH4OH zo rond de 1 ligt en van 0,1 mol/l NaOH zo rond de 13 a 14.
ik zal het eens gaan testen.

Bedankt voor de reactie allemaal.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures