Kolomproblemen

Boanerges

Ik heb een probleempje,

Ik ben bezig met een lactosebepaling op de HPLC, dit gebeurt dmv ionenwisseling. De kolom is er een op basis van polystyreen met 8% crosslinked DVB, als tegenion is Pb²⁺ aanwezig.

De lactose wordt bepaald in zuivelprodukten en geklaard met een reagens waar oa zinkacetaat in zit. Nu is het echter zo dat de scheidingen steeds minder worden, ook zie ik regelmatig pieksplitsing. Navraag bij een ander laboratorium waar men deze methode ook doet leverde op dat de monsters eerst ontzout moeten worden voordat deze geinjecteerd worden.

Dit is iets wat ik niet wist, nu ongeveer 300 injecties later is duidelijk waarom het ontzout moet worden, de loodgroepen worden verdreven door de zink. Hierdoor wordt de scheiding beduidend minder.

Ik heb geprobeerd om de kolom in backflush weer goed te krijgen, dit had even effect. Ook heb ik geprobeerd te regenereren mbv loodnitraat. Dit had ook even effect, opzich wel logisch daar lood naar mijn idee minder edel is dan zink en deze dus niet kan verwijderen.

Nu is mijn vraag, weet iemand hoe ik de zinkgroepen weer van de kolom af kan krijgen?

Organische oplosmiddelen kan de kolom niet tegen en als eluens wordt normaal ultrapuur water gebruikt.

Napoleon1981

Tja dat is het nadeel van ionexchange, je zult je kolom weer moeten regeneren dat is inherent aan ionexchange. De sterkte van het ion zal de tijdsduur bepalen....

Begrijp ik goed dat je de zink groepen wel verplaatsen kunt met lood? Het duurt heel erg lang zoiets omdat de zink groepen een hogere affiniteit hebben. Dat is het grote nadeel van ionexchange en de reden dat je het vrij weinig ziet in mijn ogen. Met edelheid heeft het trouwens helemaal niks te maken, beide zijn immers al in de zout vorm en het is geen electron transfer proces. Ik zou een geconcentreerde oplossing maken van loodnitraat (0,1M ofzo) en dit gewoon een weekend over de kolom laten lopen.

En maar een desalting stap invoeren

Boanerges

Ik had al een oplossing van 0,1M Loodnitraat geprobeerd ja, dit was echter voordat ik het wist van het ontzouten, daarna zijn er nog een aantal injecties geweest.

Ik hoop dat ik de zink groepen nog kan verplaatsen, anders als het niet meer wil zal er toch een nieuwe kolom moeten komen.

Het ontzouten gaat zeker gebeuren, we zijn nu verschillende mogelijkheden aan het bekijken. Een aantal opties zijn: zelf een voorkolom pakken met anionenhars, zodat het online ontzout wordt. Een vaste anionenwisselaar voor de kolom, of een SPE zuivering.

Napoleon1981

Maar geef het de tijd, het zal echt een tijdje duren voordat die kolom weer terug komt. Verwacht geen resultaten in 10 minuten. Ik verwacht dat je het er wel uit krijgt hoor...

Ik zelf zou kiezen voor een SPE trouwens. Voorkolommen gaan er op den duur ook aan, en dan verlies je weer je analitische kolom. Waters heeft een hydrophylic lypofilic balance SPE kolom die volgens mij redelijk moet werken op de compound die jij gebruikt. Je kunt ook dat lab bellen die je vertelde dat ze al ontzouten. Dan hoef je het wiel niet zelf opnieuw uit te vinden.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Kolomproblemen

Kolomproblemen

Re: Kolomproblemen

Re: Kolomproblemen

Re: Kolomproblemen