Springen naar inhoud

elektroforese


  • Log in om te kunnen reageren

#1

linolium

    linolium


  • >250 berichten
  • 292 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 april 2007 - 15:27

Kan iemand mij een antwoord geven op de volgende twee vragen betreffende elektroforese met DNA-fragmenten :

1) wat zou er gebeuren als de elektroforesekamer gevuld is met water i.p.v.
TBE buffer
2) wat zou er gebeuren indien water gebruikt werd voor de bereiding van de
agarosegel i.p.v. TBE buffer?

Alvast bedankt

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 09 april 2007 - 15:55

Een tegenvraag: Waarvoor dienen buffers bij elektroforese ?

#3

linolium

    linolium


  • >250 berichten
  • 292 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 april 2007 - 16:09

Ik weet dat er een neutraal tot alkalisch mileu moet zijn zodat DNA gedeprotoneerdt blijft
maar water is ook neutraal alkalisch.
ik weet wel dat TBE een hoger kookpunt geeft dan water wat mss een voordeel is
indien water zou verdampen bij 125 V wat ik niet weet.
ook weet ik dat TBE EDTA bevat die magnesium ionen kan vasthouden wat co-enzymen zijn voor de restrictie-enzymen dat zou mss het antwoordt kunnen zijn
betreffende de bereiding van de gel maar ik had hier graag nog eens bevestiging van gehad of deze conclusie juist is.

#4

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 09 april 2007 - 18:21

Je mist het punt waar het omgaat, hoe zit het met het verschil in geleidbaarheid voor electriciteit tussen TBE en water?

#5

linolium

    linolium


  • >250 berichten
  • 292 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 april 2007 - 09:16

Zou water te snel geleiden zodat er geen goede scheiding van je fragmenten zou zijn of zo ? en betreft dit dan de bereiding van de gel (water gebruiken ipv TBE buffer) of de elektroforesebuffer?

#6

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 10 april 2007 - 10:01

Zou water te snel geleiden

Zuiver water is een zeer goede isolator, bij de electroforesespanningen zul je geen meetbare stroom vinden.

#7

linolium

    linolium


  • >250 berichten
  • 292 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 april 2007 - 12:30

OK bedankt dit verklaardt dan al waarom TBE in de bufferkamer wordt gedaan maar waarom kan je dan geen water gebruiken voor het bereiden van de agarosegel? of geldt hier hetzelfde antwoordt?

#8

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 10 april 2007 - 13:54

Yep

#9

Bevers

    Bevers


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 september 2007 - 10:15

Ik dacht ik maak maar geen nieuwe topic en ga verder in deze.
Ik snap nu dat de TEB Buffer voor een goede geleiding zorgt sinds water een goede isolator is. Maar mijn vraag nu is waarom je bij je samples soms een loadingbuffer moet gebruiken? Ik weet wel wat een buffer is maar kan iemand mij zowiezo eerst ff uitleggen wat een loadingbuffer precies is ?

#10

koenigo

    koenigo


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 maart 2011 - 12:39

De loadingbuffer bestaat uit 2 kleurstoffen: Bromofenolblauw en Xyleencyanol.
Tijdens de elektroforese lopen deze 2 kleurstoffen mee als indicatie hoe ver het DNA al gelopen is. (dit omdat DNA tijdens de elektroforese onzichtbaar is).
Bromofenolblauw migreert door een 0,8% agarose gel met een snelheid die equivalent is met een DNA-fragment van 300bp. Xyleencyanol met een snelheid van 9000bp.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures