Wetenschapsforum

Hoi!

Ik heb een test gedaan door verschillende kolomtemperaturen te gebruiken. Bij een hogere temperatuur worden de retentietijden langer.

Kan dit theoretisch wel?

Dit heb ik nog niet eerder gehoord en volgens mij kan dit ook niet.

Bij een hogere temperatuur is de viscositeit lager en kan de vloeistof makkelijker (= sneller) door de kolom

Bij een hogere temperatuur is de viscositeit lager en kan de vloeistof makkelijker (= sneller) door de kolom

En dat resulteert dus in een lagere back pressure en niet sneller. Je stelt een flowrate in en niet een druk normaal gesproken.

@vraagsteller,

Kun je wat details geven? Wat is de stationaire fase? Wat zijn de stoffen die je probeert te scheiden?

normaal gesproken zouden je stoffen sneller van de kolom af komen

Hoi!

Ja klopt t'is een beetje vreemd maar ik heb het met verschillende blanko's getest.

De stationaire fase is een C18 kolom. En het stofje dat ik test is theophylline.

informatie van Theophyllinevan wikipedia.

heb je misschien nog wat meer informatie over je "project/opdracht"? (wat waren je eerste instellingen en hoe heb je het veranderd?)

De kolomtemperatuur stond eerst op 30 graden en die heb ik gevarieerd met 5 graden. Dus 25 en 35 graden.

De temperatuur kan niet te hoog gezet worden omdat de mobiele fase uit stoffen bestaat met een laag kookpunt.

wat gebeurt er dan met de retentietijd van theophylline bij 25 graden???

Deze wordt kleiner.

8-[ en je weet zeker dat je de resultaten niet per ongeluk hebt verwisseld

ik vindt het namelijk vreemd dat ze net omgekeerd zijn

heb je misschien de naam van de kolom ook voor mij?

anders zou je zelf even hier kunnen kijken voor een aantal chromatogrammen (staan verschillende namelijk met C18 kolom)

gewoon je stof bij compound invullen en dan vindt ie ze wel

Kolom is een Chromspher SI

Ik zal kijken!

Marie-Louise schreef: De kolomtemperatuur stond eerst op 30 graden en die heb ik gevarieerd met 5 graden. Dus 25 en 35 graden.

De temperatuur kan niet te hoog gezet worden omdat de mobiele fase uit stoffen bestaat met een laag kookpunt.

Het is een HPLC, wat gebeurd er in gesloten systemen en hoge drukken met kookpunten? Je zult eerder een supercritische vloeistof krijgen dan dat je vloeistof gaat koken... En dit gebeurd trouwens nog niet bij 35 graden, welk normaal loopmiddel je ook gebruikt.

Kolom is een Chromspher SI

Dit is een silica kolom suggereert de naam, deze discussie hebben we trouwens al eerder gehad. Dit is GEEN C18 en dus geen RP-LC. Je te analyseren stof is trouwens ook wel erg polair voor een C18 kolom. Welke loop vloeistof gebruik je? En nog maals weet je zeker dat je geen normalphase LC doet? Dan werkt alles ineens omgekeerd

Ik doe een (wilde) gok: volgens de literatuur heeft theophylline een effect op de regulatie van de lichaamstemperatuur. Ik kan mij voorstellen dat de temperatuur ook een invloed kan hebben op de molecuulstructuur van theophylline (en dat daar ook de werken van theophylline vandaan komt). De temperatuur zou bijvoorbeeld een invloed kunnen hebben op de pKa van het molecuul. Als de stikstof in de vijfring van theophylline bij variërende temp wel of niet geprotoneerd is, dan heeft dit invloed op de retentie tijdens de scheiding.....(het is maar een gok)

Over de invloed van de temperatuur op een LC-scheiding: een hogere temperatuur heeft over het algemeen een positieve invloed op je scheiding. De hogere temperatuur zorgt voor een verhoogde `mass transfer´ oftewel een verhoogde snelheid waarmee de moleculen tussen de mobiele fase en de stationaire fase bewegen. Dit zorgt voor een hogere resolutie.

Het verhaal gaat natuurlijk niet altijd op: bijvoorbeeld bij moleculen die instabiel zijn bij hogere temperaturen.

Bas

edit: ik typ te traag of Leon typt te snel.....