Springen naar inhoud

Problemen op HPLC systeem


  • Log in om te kunnen reageren

#1

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 07 juni 2007 - 21:23

Hallo,

We hadden op het werk weer een probleem gisteren. De amprolium analyse gedraaid op systeem 3. De analyse was waardeloos. Slechte controles en slechte duplo's .

Dezelfde monstervoorbereiding op systeem 1 gedraaid en nu goede controle reeks en goede gehaltes.

De kolom en het eluens zijn gewoon meer over gegaan en zijn dus hetzelfde gebleven.

Systeem 3 wordt vaak gebruikt en geeft bijna altijd goede resultaten, bij andere analyses.

Bij de analyse van een andere aktieve component, Tylosine geeft de meting geen probleem met de grondstof maar met het meten van een eindprodukt, tylosine + draagsof Na2SO4 worden te lage gehaltes gevonden.?

Bij het andere systeem 1 geeft dit ook weer geen problemen.

Wat voor effecten kunnen er in zo'n situatie meespelen.

Systeem 3 heeft een Gilson injector en systeem 1 eentje van Waters, de 700.

Kan zon verschil te verklaren zijn door de tubing , de leidingen dus?

Of kan het liggen aan het soort sample loop. Of waaraan dan ook want ik kan dit in principe niet verklaren.

Wie gooit er een balletje op??
Alvast bedankt!!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 juni 2007 - 05:27

Tubing lijkt me sterk.

Draai je een gradient? Die kunnen nogal eens systeem specifiek zijn, met mixer volumes etc.

#3

drune134

    drune134


  • >250 berichten
  • 873 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 juni 2007 - 06:12

lekkage bij je injectie systeem, loop.
Wat voor een injector heb je, merk, type?

#4

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 juni 2007 - 21:13

Hoi Napoleon,
Er wordt geen gradient gedraait, kan wel met dit systeem.

Hoi Drune134.
Het is geen lekage of injectievloume probleem volgens mij. Er worden namelijk twee componenten tegelijk gemeten. Als het een injectie volume probleem was dan zouden ze synchroom met elkaar varieren, of niet.?
Dit is niet het geval volgensmij. Ik zal er dinsdag nog eens op letten.


De vorige keer, half jaar geleden, heb ik wat met de loops zitten verwisselen. Het betreffen vaste RVS loops. We hadden er 3 liggen en 2 ervan gaven afwijkingen en een niet.
We hebben dit toen niet genoeg uitgezocht en zijn door tijdsdruk verder gegaan met analyseren .
Zou het een vervuiling van de loop kunnen zijn?
We spoelen de loop telkens met MeOH/H2O.
Als we deze eens goed schoon zouden willen maken hoe zouden we dat het beste kunnen doen?
Groetjes Harrie

#5

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 08 juni 2007 - 22:02

Nachtje in dat mengsel op 40 graden ofzo. Ik weet niet of dit ook in een ultrasoon bad kan en naderhand uitspoelen met die oplossing.

#6

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 juni 2007 - 23:19

Hoi Napoleon,
Er wordt geen gradient gedraait, kan wel met dit systeem.

Hoi Drune134.
Het is geen lekage of injectievloume probleem volgens mij. Er worden namelijk twee componenten tegelijk gemeten. Als het een injectie volume probleem was dan zouden ze synchroom met elkaar varieren, of niet.?
Dit is niet het geval volgensmij. Ik zal er dinsdag nog eens op letten.


De vorige keer, half jaar geleden, heb ik wat met de loops zitten verwisselen. Het betreffen vaste RVS loops. We hadden er 3 liggen en 2 ervan gaven afwijkingen en een niet.
We hebben dit toen niet genoeg uitgezocht en zijn door tijdsdruk verder gegaan met analyseren .
Zou het een vervuiling van de loop kunnen zijn?
We spoelen de loop telkens met MeOH/H2O.
Als we deze eens goed schoon zouden willen maken hoe zouden we dat het beste kunnen doen?
Groetjes Harrie

Ah, weet je zeker dat de afstand van de knelfitting klopt? Gebruik altijd een nieuwe loop of een loopt die alleen op die of dat type injector gezeten heeft. Andere merken hebben verschillende afstanden van einde van de tubing tot knelkoppeling, met als gevolg dode volumes etc.

#7

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 juni 2007 - 16:32

[QUOTE]Ah, weet je zeker dat de afstand van de knelfitting klopt? Gebruik altijd een nieuwe loop of een loopt die alleen op die of dat type injector gezeten heeft. Andere merken hebben verschillende afstanden van einde van de tubing tot knelkoppeling, met als gevolg dode volumes etc.
[QUOTE]

Hoi Napoleon,
Ik snap niet wat je bedoeld. Het exacte volume van de loop is in principe toch niet van belang, als het maar iedere keer hetzelfde is?
Dode volumes waar kunnen die komen zitten? En als ze er zitten kan het dan zo zijn dan ze bij bepaalde analyses problemen geven en bij andere analyses niet??
Want dat is bij ons toch redelijk zeker aan de hand.

Toch is dit een erg interressante tip, volgens mij van die dode volumes. Ik zal dinsdag nog eens kijken of ik er iets mee kan.

Groetjes Harrie

#8

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 09 juni 2007 - 17:07

Het gaat om het stukje tussen loop en bijvoorbeeld de kraan, als dat niet perfect past, krijg je een holte tussen loop en het vervolg.

#9

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 juni 2007 - 17:10

http://www.vici.com/...tro/fi_val2.php

Dit is het duidelijkste plaatje wat ik zo vinden kan. Het dode volume in die connecties is meer dan alleen volume, het kan echt piek shapes omzeep helpen en ga zo maar door.

Mja verder is het natuurlijk geen magie, als het voor de ene analyse wel goed werkt, dan moet het voor de andere ook goed werken lijkt mij. Wat verander je dan voor een andere analyse? Alleen het analiet?

#10

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 juni 2007 - 22:04

Bij een andere analyse meet je een andere componemt, analiet, daartoe heb je een andere kolom en anders eluens nodig.

#11

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 juni 2007 - 01:59

Zo vanzelf sprekent vind ik dat niet hoor.

#12

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 29 juni 2007 - 19:12

Hoi Napoleon 1981,

QUOTE]Ah, weet je zeker dat de afstand van de knelfitting klopt? Gebruik altijd een nieuwe loop of een loopt die alleen op die of dat type injector gezeten heeft. Andere , met als gevolg dode volumes etc.
[QUOTE

Als je een nieuwe loop koopt voor de gilson injector dan zitten de knelkoppelingen los om de leiding.
De goede, beste afstand van de plek van de knelkoppeling op de leiding hoe bepaalje die??
Doe je dat door de leiding zover mogelijk in de opening te steken en dan vast te draaien of juist zo dat de knelkoppeling zo dicht mogelijk bij het uiteinde van de leiding zit.
Zit de knelkoppeling dicht bij het uiteinde van de leiding dan is wordt het injectie volume natuurlijk wel iets groter, absoluut gezien!
Voor de analyse zal dat niets uit maken, toch?

Groetjes Harrie

#13

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 juli 2007 - 08:21

Hallo,
Ik heb deze week nogeens een dag aan het probleem gewerkt en wat proefjes gedaan.

Ik zit de oplossing nu in een geheel andere hoek te zoeken.
Na wat proefjes met injecties van het eindprodukt met daarna een blanco kreeg ik een recovery in de blanco van 8%. Prikte ik dan een controle met alleen de aktieve component dan had ik een recovery van 1 % ongeveer.

Toen ben ik gaan wisselen met de spoelvloeistoffen. Hieruit kwamen erg grote verschillen.
Met MeOH had ik weer de recovery van 8%. waarde van het eindprodukt 23
Met H2O met lactic acid (PH=3) rec. van 2%. waarde eindprodukt 16!!!
Met Eluens (PH=3) recovery van 2% waarde eindprodukt 23.

Wie kan de lage waarde van het eindprodukt van 16 enisinds verklaren. Vor de duidelijkheid de waardes van het eindprodukt komen alle uit hetzelfde vialtje!!
Hoe kan het zijn dat De Spoelvloeistof zo'n grote heeft op deze eindwaarde. Het verschil in recovery is nog wel te verklaren maar het verschil van 23 en 16 snap ik helemaal niets.
Alle proefjes zijn in viervoud gedaan en de reproduceerbaarheid was ,gelukkig, goed.
Groetjes Harrie

#14

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 juli 2007 - 13:57

Ja je moet de tubing eerst recht afsnijden en dan zover mogelijk in de fitting duwen en dan vast draaien.

Lost je compound goed op in MeOH? Zou het kunnen zijn dat methanol niet goed wast?

#15

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 juli 2007 - 17:02

Hoi (Napoleon),
We hebben een gilson injector die werkt met een naald die opzuigt in een spiraal slang met een inhoud van 1,1 ml. Nu heb ik straks kontakt gehad met Gilson en die vertelde me dat de injector eerst een luchtbel op moet zuigen en dan pas het sample. Dit gebeurd bij ons niet dus het sample komt in kontakt met de spoelvloeistof. Zou dit een oorzaak kunnen zijn??
Ik ga dit morgen uittesten!!
Groetjes





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures