Voor een eiwit bepaling ben ik bezig om een 2D gel te maken en daarvoor heb ik de MicroRotofor van Bio-Rad ter beschikking maar ik vindt het nog al een complex en onhandig apparaat. Dus mijn vraag is of iemand ervaring met dit apparaat heeft en ook tegen problemen aan is gelopen of mij wellicht wat tips kan geven.
Alvast bedankt,
Sam
3e jaars Biochemie student HLO
Laatste berichten
-
00:15
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
22:27
positie 1
-
21:15
Weerfrustratie 9
-
18:24
Schroefdraad berekening 5
-
18:08
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 15
-
14:16
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 7
-
14:16
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
13:57
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
10:42
projectiel 8
-
10:37
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
09:25
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
-
21 apr
Reactiviteit silyl enol ethers 1
-
21 apr
Criterium voor vochtretentie
-
21 apr
speciale rel. theorie 5
-
21 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers
-
21 apr
Ervaringen met "herontdekkingen" 15
-
20 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 19
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Ervaring met IEF MicroRotofor van Bio-Rad
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 125
Re: Ervaring met IEF MicroRotofor van Bio-Rad
Toen het ding op de markt kwam, hebben we er wat mee geprobeerd. Maar zoals je al schrijft is het een complex en onhandig apparaat. We hebben er dan ook nooit een goede pre-fraktionering mee kunnen krijgen.
Wat voor eiwit bepaling wil je doen, wat voor 2D systeem? Hou er wel rekening mee dat iedere pre-fraktioneringsmethode weer een variabele toevoegd aan je experiment. En deze is vrij lastig te reproduceren.
sjouke
Wat voor eiwit bepaling wil je doen, wat voor 2D systeem? Hou er wel rekening mee dat iedere pre-fraktioneringsmethode weer een variabele toevoegd aan je experiment. En deze is vrij lastig te reproduceren.
sjouke
-
- Berichten: 2
Re: Ervaring met IEF MicroRotofor van Bio-Rad
Wij willen van verschillende melanoom cellijnen de eiwit expressie vergelijken. De verschillende cellijnen hebben verschillende modificaties van het ALCAM eiwit en wij willen kijken wat voor gevolg dit heeft voor de eiwit expressie van de verschillende cellen. Ook willen wij de eiwitten in de vesicles van deze cellen gaan vergelijken met die van de cellen. De opdracht is tot om dit aan de hand van 2D gel electroforese te doen. En voor de IEF hebben we dus de MicroRotofor voor onze beschikking en voor de 2e dimensie gebruiken we een SDS page.
Is dat wat je bedoelt?
Sam
Is dat wat je bedoelt?
Sam
-
- Berichten: 125
Re: Ervaring met IEF MicroRotofor van Bio-Rad
Niet helemaal. Als je voor de eerste dimensie alleen de MicroRotofor gebruikt zul je weinig opschieten. De MicroRotofor is ontwikkeld om een complex eiwit mengsel (bv. je cell lysate) te fraktioneren. De fraktionering wordt in oplossing gedaan en is gebaseerd op IEF. Het is dan de bedoeling deze frakties of direkt voor een LC-MS/MS te gebruiken na trypsin digestie of deze frakties op IPG strips (IEF) te laden, gevolgd door een normale SDS-PAGE. Je moet dan dus wel meer 2D gelen maken. Dus alleen de Rotofor voor de eerste dimensie zal niet werken, zeker niet als je minimale verschillen wilt vinden in je cellen.
sjouke
sjouke
