Substraatconcentratie

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 16

Substraatconcentratie

Ik heb een vraagjes over de concentraties bij een practicum met enzymkinetiek. Zal eerst even wat uitleggen over het practicum.

Het doel was de activiteit van β-galactosidase berekenen. Hiervoor hebben we ONPG gebruikt. Dat is het substraat, het product is dan ONP.

Naarmate de proef vorderde ontstond meer ONP en werd dus ONPG omgezet. De extinctie nam toe.

1. Maar voor de michaelis-menten-vergelijking gebruik je toch de concentratie van het substraat, terwijl in de formule van de molaire extinctie-coefficient de concentratie substraat of product?

2. Hoe bereken ik dan precies de concentratie substraat? Als je namelijk weet hoeveel ONPG er is omgezet of hoeveel ONP er is ontstaan, kun je bepalen hoeveel ONPG er nog is, maar ik heb geen van beide waarden.

Met behulp van de molaire extinctie-coefficient (die ik eerst eens zou moeten opzoeken, want die van mijn proef klopte niet helemaal geloof ik) doe ik dat?

En klopt het dat ik een kromme krijg, wanneer ik de extinctie uitzet tegen de tijd?

Heb eigenlijk nog veel meer vragen, maar misschien kan ik het antwoord daar zelf wel op bedenken als ik met de Vmax aan de gang kan...

Als iemand me dit kan vertellen; heel erg bedankt!

Berichten: 2.399

Re: Substraatconcentratie

Je gebruikt inderdaad de extinctie om je hoeveelheid product of substraat te volgen. Je substraat zal afnemen de hoeveel product zal toenemen. De extinctie is dus recht evenredig met een concentratie of omgekeerd everredig, maar net wat je volgt.

De michaelis menten vergelijkig. Uit de michaelismenten vergelijking krijg je informatie over je kinetiek (de activiteit). De concentratie moet je inderdaad weten, maar die is (omgekeerd)evenredig met de exctinctie afhankelijk van wat je volgt ;) . Ja het is logsich dat je een kromme krijgt, dit komt omdat je waarschijnlijk het enzym verzadigt. Als je dit neit doet kun je trouwens ook geen Vmax bepalen, dan gedraagt de michaelis menten kinetic zich gewoon als een eerste orde proces. Zoek eens een typische michaelis menten plot op.

Reageer