Wetenschapsforum

heyhey, ik had een vraagje ivm het bereiden van een monster om later in de gaschromatograaf te injecteren. bij het bereiden van de monster, bv bloedserum, wordt er ook propanol en NaCl toegevoegd... ik weet eigenlijk niet waarom deze twee worden toegevoegd?

ik zal even het protocol erbij zetten zodat het mss wat duidelijker wordt

GC bepaling: Alcohol in runderserum

Benodigdheden:

- GC systeem

- Centrifuge incl. kleine centrifugebuizen (niet groter dan 13 ml)

- Ebjes

- THF(99,8%)

- NaCl (99,5%)

- Runderserum

- Ethanol (99,8%)

- Propanol (99+%)

GC eigenschappen:

Injectie: Split-injectie (30:1), 250°C

Oven: 55°C Isotherm

Detectie: FID detector, 275°C

Druk: 30 kPa

Kolom: Alltech Eneco-Cap 5, CP index 8,

30m x 0,25mm

Werkwijze:

Standaarden

• Bereid 7 stockstandaarden ethanol met concentraties van 0, 40, 395, 790, 1580, 2370 en 3160 mg/dL. Doe dit door 0, 0.05, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 en 4.0 ml ethanol te pipetteren in 100 ml maatkolven en aan te vullen met milli-Q tot de maatstreep.

• Bereid de interne standaard extractievloeistof; Pipetteer 1.0 ml n-propanol in een 250 ml maatkolf en vul aan met THF.

• Pipetteer 1.0 ml runderserum in een centrifugebuis (7x).

• Pipetteer vervolgens 0.1 ml van elke stockoplossing ethanol in een centrifugebuis.

• Pipetteer in elke buis 1.0 ml interne standaard extractievloeistof.

• Voeg aan elke buis ca. 1 gram NaCl toe.

• Schud de buizen gedurende 5 minuten.

• Centrifugeer de buizen gedurende 10 minuten bij 2500 rpm.

• Zuig de bovenste (heldere) laag vloeistof uit de centrifugebuis en stop deze in een ebje.

• Injecteer 1 μl van elke standaard op de GC.

Monster

• Pipetteer 1.0 ml serummonster in een centrifugebuis.

• Pipetteer 0.1 ml milli-Q in de centrifugebuis.

• Pipetteer 1.0 ml interne standaard extractievloeistof in de centrifugebuis.

• Voeg ca. 1 gram NaCl toe.

• Schud de centrifugebuis gedurende 5 minuten.

• Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 2500 rpm.

• Zuig de bovenste (heldere) laag vloeistof uit de centrifugebuis en stop deze in een ebje.

• Injecteer 1 μl van de monsteroplossing op de GC.

groetjes Fleur

Ik weet het niet zeker, maar ik denk dat runderserum een waterige basis heeft? Het zout wordt dan toegepast om de ionensterkte van het serum te verhogen. Hierdoor wordt het ethanol met meer rendement door THF uit het serum geëxtraheerd.

Propanol: deze injecteer je in elke buis, ook die met de serummonsters. Je weet exact hoeveel propanol je toevoegt en hoeveel je bij de GC-meting terug moet vinden.

Als er tijdens het werk iets gebeurt waardoor je monstermateriaal kwijtraakt (met ethanol) dan kun je dat zien aan de hoeveelheid propanol die je bij de meting terugvindt. Je kunt hier zelfs voor corrigeren, ervan uitgaande dat er met de propanol precies hetzelfde gebeurt als met de ethanol. Dat is de werking van een interne standaard (in dit geval propanol).