Springen naar inhoud

HPLC (Invloed van de polariteit van mobiele fase)


  • Log in om te kunnen reageren

#1

-Toms-

    -Toms-


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 17:08

Ik en men lab partner gebruikten HPLC om een mengsel van cafeine, fenacetine, acetylsalicylzuur en 'iets' (waarvan de naam mij even ontgaat) te scheiden. De kolom was een RP18 kolom en de mobiele fase bestond uit 50/50 acetonitrile/ultra puur water.

Nu werd er de vraag gesteld wat er zou gebeuren mochten we een mengsel van 60/40 acetonitrile/ultra puur water gebruikt hebben als mobiele fase. Men labo partner dacht dat de retentietijden allen gewoon zouden vergroten, terwijl ik dacht dat de retentietijden dichter bij elkaar zouden komen te liggen en de resolutie dus zou verkleinen.

mijn redenering:
polaire onbekenden (die normaal eerst elueren):
minder affiniteit voor de mobiele fase, dus zal een grotere tijdsfractie doorbrengen in de stationaire fase en dus zal de retentietijd vergroten

apolaire onbekenden (die normaal laatst elueren):
meer affiniteit voor de mobiele fase, dus zal een kleinere tijdsfractie doorbrengen in de stationaire fase en dus zal de retentietijd verkleinen

nu is mijn vraag, heb ik gelijk of heeft zij gelijk? :P

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 18:39

De retentie tijd verkleint inderdaad. Jij hebt dus gelijk :lol:

#3

-Toms-

    -Toms-


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 19:35

bedoel je eigenlijk dat de resolutie verkleint ipv de rententietijd? anders hebbe we geen van beide gelijk :P

#4

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 20:15

Er is een verschil tussen retentie en resolutie.

Bij stijgende hoeveelheid organisch solvent zal de mobiele fase meer lijken op de stationaire fase wat polariteit betreft. Dat betekent dat alle retentietijden kleinder worden.

De resolutie verkleint ook:

Rs evenredig met k/(1+k) (naast nog andere factoren)

met k de retentiefactor

k = (tr - tm)/tm

met tr de retentiefactor en tm de mobiele fasetijd.

Componenten langer op de kolom houden verbetert dus de resolutie.

#5

-Toms-

    -Toms-


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 20:31

Bij stijgende hoeveelheid organisch solvent zal de mobiele fase meer lijken op de stationaire fase wat polariteit betreft. Dat betekent dat alle retentietijden kleinder worden.

Het leek me logisch dat polaire stoffen trager zouden elueren met een apolairdere mobiele fase, daar zat ik dus fout blijkbaar.

Het verschil tussen retentie ren resolutie wist ik wel hoor, maar met mijn (foute) redenering als de pieken dichter bijeen zouden komen te liggen dan zou
Rs= (tR2 - tR1)/(W1 /2 +W2 / 2)
kleiner worden

(5 keer ofzo moete editten om mij duidelijk te maken ma khoop dat et gelukt is :P)

Veranderd door -Toms-, 18 november 2007 - 21:01


#6

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2007 - 21:09

Er is een trade off. Hoe langer componenten op een kolom blijven, des te meer piek verbreding heb je ook. Wanneer je geen resolutie kunt krijgen met een k waarde tussen 5 en 10, gaat het je waarschijnlijk ook niet meer lukken als je het nog 20 minuten langer op een kolom laat zitten. Dit heeft te maken met de selectiviteits factor van een kolom.

Veranderd door Napoleon1981, 18 november 2007 - 21:12






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures