Springen naar inhoud

injectievolume hplc


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Tamara86

    Tamara86


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 januari 2008 - 10:39

Hallo,

Voor mijn stageonderzoek heb ik zetpillen opgelost in ethanol:dichloormethaan:ijsazijn 5:5:1. Dit heb ik verder doorverdund met fosfaatbuffer. Mijn eluens is acetonitril:fosfaatbuffer pH 4,0. Dit wijkt natuurlijk wel af van mijn oplosmiddel, hierdoor zou ik verschil in retentie kunnen krijgen en piekvorm verandering. in mijn verslag moet ik nu uit leggen hoe dat komt maar ik kom er niet echt uit? Kan iemand mij even helpen?

Bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 januari 2008 - 13:10

Dichloormethaan en ethanol zijn vreselijk sterke eluenten in een reversed phase HPLC. Dat wil zeggen dat je al elutie krijgt onder invloed van je injectie, met zeer brede pieken tot gevolg.

Om dat te vermijden kan je twee dingen doen:

- je injectievolume verkleinen (dit moet absoluut veel kleiner zijn dan 10ÁL), maar dat heeft het nadeel dat je methode veel aan gevoeligheid verliest. Verder is het niet altijd mogelijk/praktisch om een andere injectieloop te monteren.

- De normale oplossing is om het extract zoveel mogelijk uit te dampen in een stikstofstroom, en dan terug aan te lengen met bvb 1 mL van het eluent. Eventueel kan je na het indampen een inwendige standaard toevoegen, zodat je niet heel exakt moet werken met het volume dat je toevoegt. Dat kan je immers berekenen aan de hand van de respons van de inwendige standaard.

Overigens, heb je geen probleem met de mengbaarheid van je extractiesolvent met de fosfaatbuffer?

#3

Tamara86

    Tamara86


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 januari 2008 - 20:45

Als ik mijn oplosmiddel doorverdun met fosfaatbuffer blijft er altijd een soort druppel in mijn maatkolf liggen ( waarschijnlijk dichloormethaan) dit is echter niet storend want de werkzame stoffen (paracetamol en codeine) komen in de fosfaatbuffer terecht. Dit is nagegaan door een exacte hoeveelheid erin te stoppen en daarna te injecteren op de HPLC.

heel de methode die ik opgezet hebt klopt gewoon, is al een aantal maal nagegaan er komen gewoon goede resultaten uit, wilde alleen het theoretische gedeelte erachter weten, ik heb er namelijk geen last van ( verschil in retentie en piekvorm verandering).

Veranderd door Tamara86, 29 januari 2008 - 20:47






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures