Springen naar inhoud

immuno assay


  • Log in om te kunnen reageren

#1

lucilius

    lucilius


  • >250 berichten
  • 254 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 april 2008 - 15:00

Hallo allen,

Ik heb de volgende vraag:

bij het gebruiken van een vaste fase assay voor antilichamen ga je een plaat coaten met een antigeen dan staat er dat men het vrije antigeen zal wegwassen en daarachter staat bijgeschreven tussen haakjes dat men de plaat blokeert met een overmaat irrelevant eiwit om te voorkomen dat tijdens het vervolg niet specifieke binding van eiwitten optreedt. (is dit dan de manier om die overmaat weg te wassen?)

Maar dit snap ik toch niet, als je irrelevant eiwit gaat laten binden op je antigenen die geadsorbeerd zijn op je plaat en de vrije antigenen (het niet geadsorbeerde dus vrije antigeen) dan kan later het antilichaam er toch nietmeer op binden?

Of ga je tijdens het wassen al dat eiwit wegwassen dat gebonden is op die vrije antigenen + al het eiwit dat gebonden was op de antigenen die op je plaat geadsorbeerd zijn (met andere woorden je gaat die eiwitten terug van die antigenen halen die op die plaat zitten en daar blijven zitten?)

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 april 2008 - 17:17

Even kort:
Je laat je antigenen binden, dit doe je in een buffer met een sterke oppervlakte spanning zodat de eiwitten tegen de randen "geduwd".
Vervolgens was je alle niet gebonden antigenen weg met de wasstap. Vervolgens blokkeer je de nog overgebleven stukken, waar geen antigeen gebonden is met bijvoorbeeld gelatine of BSA. Doe je dit niet, dan kunnen hier alle antilichamen uit de volgende stap binden, dus ook mogelijk antilichamen niet specifiek zijn (oftewel degene die je niet wilt meten).
Hiermee voorkom je dus vals positieve uitslagen en wordt de sensitiviteit van de test een stuk hoger.

#3

lucilius

    lucilius


  • >250 berichten
  • 254 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2008 - 13:05

ok

dank u wel voor uw antwoord.

Nu begrijp ik het, je gaat de irrelevante eiwitten doen binden op de stukken plaat waar geen antigenen opzitten.
Je gaat niet de antigenen doen binden met het irrelevantie eiwit..

het stond niet zo duidelijk in de cursus.
Ik dacht dat je de antigenen ging doen binden met het irrelevante eiwit.. wat natuurlijk niet logisch lijkt.


Toch nog de volgende vraag: gaat die gelatine of BSA niet binden met die antigenen?

#4

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2008 - 17:10

Nee, deze hebben geen bindingsaffiniteit voor elkaar en zullen dus normaal gesproken niet binden.
De antigeen-antilichaam interactie is daarentegen weer zeer sterk, waardoor deze dus wel zal binden.

#5

lucilius

    lucilius


  • >250 berichten
  • 254 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 april 2008 - 11:10

ok

hartelijk bedankt voor uw antwoord.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures