Springen naar inhoud

Cellulosebepaling en PLA


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Xochipilli

    Xochipilli


  • >25 berichten
  • 53 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 05 mei 2008 - 17:48

We hebben een Cellulosebepaling uitgevoerd volgens de volgende methode:

- 1/500 oplossing van materiaal (cellulose en PLA) in 100 mM NaOAc-buffer pH 4,8. Hieraan werd 1000 µl cellulase (Celluclast 1500 units/g) en 250 µl β-glucosidase (Novozyme 188) toegevoegd.
- Dit werd overnacht al schudden geďncubeerd bij 50°C.

-> Nu is de cellulose dus omgezet naar Glucose en kunnen we een glucosebepaling op volgende manier uitvoeren.

- Staal nemen en afcentrifugeren
- in de microtiterplaat (per hokje):
. 40 µl staal
. 160 µl GOD-POD reagens (onderaan beschreven*)
- Dit wordt voor 30 min. bij 37°C geincubeerd.
- Dan meten we de absorbantie van de microtiterplaat bij 405 nm.


En dit zijn onze resultaten in Absorbantie (gemiddelde):
Katoen (100% cellulose): 0,172
PLA : 0,142
1 µM glucose: 0,180
25 µM glucose: 0,188
50 µM glucose: 0,189
100 µM glucose: 0,216


Nu, de ijklijn is niet nauwkeurig, dat weet ik, maar ik vind het zo raar dat de PLA (Polymelkzuur) zo een hoge waarde heeft, normaal zou PLA toch geen cellulose of glucose mogen bevatten?
Weet er iemand hoe het komt dat hij zo een hoge absorbantie waarde meet voor PLA? Ik heb zelf al liggen zoeken, maar omtrent absorbtiegegevens vind ik niets over PLA, en volgens mij wordt het ook niet afgebroken door 1 van de enzymen.
Ben ik mis en kan het misschien wel worden afgebroken?

Dit is al de 2de maal dat we dit meten, dit omdat we de eerste keren ook zo een rare waarden uitkwamen, dus spijtig genoeg hebben we geen tijd meer om het een 3de maal uit te voeren.

Ik hoop dat iemand mij kan helpen.


(*) GOP-POD
- 877 µl GOD-oplossing (GOD = GlucoseOxidase) (SIGMA, 50000 U/45ml)
- 173 µl POD-suspentie (POD = PerOxidase) (5mg POD (1000 u/57 mg) in 1 ml 3,2 M (NH4)2SO4)
- 50 mg ABTS (2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)
- Aangelengt tot 100 ml met 0,1 M Acetaatbuffer pH 5
_Destroying in order to Create, Creating in order to Destroy_

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 05 mei 2008 - 20:46

Volgens mij kun je op basis van deze resultaten helemaal niets concluderen. De variatie in je meetwaarden is VEEEEL te klein!

Als je toch wilt proberen iets te concluderen: De PLA resultaten zijn veel lager dan de laagste glucoseconcentratie, eigenlijk zou ik denken dat het resultaat voor 0 microgram heel dicht bij 1 microgram zou moeten liggen.

Heb je ook een blanko gemeten?





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures