Springen naar inhoud

Gist bepaling?


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Khyar

    Khyar


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 06 mei 2008 - 16:01

hallo allen,

ik ben bezig met een gist bepaling uit een organische extractie van mijten.

het volgende heb ik al meerdere keren geprobeerd zonder gewenst resultaat.

sandwich ELISA
gist ELISA kit is ook al geprobeerd.

dot/spot blotting dmv. gist extractie en daarvan een ijlijn te maken van 100% tot 0.19% ook zonder gewenst resultaat hierbij kwam ik tot conclusie dat een mijt extract +800% gist bevatte 8-[

verdere informatie:

de gist is inactief
ik gebruik polyklonale antilichamen ook heb ik eens anti pgk geprobeerd ( geen resultaat)
S. cerevisiae is de gist die ik moet bepalen.

mijn vraag dus... weten jullie misschien een "vrij eenvoudige"gist bepalings methode?

of hebben jullie suggesties die mij op weg kunnen helpen?

als jullie meer vragen weten vraag gerust.

B.V.D.
John

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

epiphonix

    epiphonix


  • >250 berichten
  • 915 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 06 mei 2008 - 16:57

Is microscopie geen optie?

#3

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 06 mei 2008 - 20:24

Het is moeilijk met zo weinig informatie te zeggen waar het aan kan liggen.
1. wat is precies je monstermateriaal?
2 Hoe wordt de extractie uitgevoerd, wat moet er worden geextraheerd en is het een al bekende methode?
3. Bij de elisa en dot/spot welke antilichamen woden er precies gebruikt waartegen en waarin opgewekt?

#4

Khyar

    Khyar


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 mei 2008 - 08:04

monstermateriaal is mijt bodie ( alleen maar mijt) extract d.m.v. turrax (afgedraaid om een heldere vloeistof te verkrijgen)

methode:
2x 30 sec turrax van een +/- 2% oplossing
10 min op schudder
10 min afdraaien bij 14k rpm.

1ste antilichaam = rabbit anti S. cerevisiae
2de antilichaam = monoklonaal anti rabbit igg (volgens mij uit mouse)

#5

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 08 mei 2008 - 09:23

Twee dingen:
Je monster is mijtbody, ik neem aan dat dit een gezuiverd preparaat is waarom zou er gist in moeten zitten? Zou het niet kunnen dat het echt negatief is?
Heb je positieve controles meegenomen met de testen?

Dan de extractie
Is 10 minuten wel voldoende? ik gebruik bij extracties van dit soort materiaal minimaal 2 uur alhoewel je bij 10 minuten denk ik alwel een signaal zou moeten krijgen.
Welke extractievloeistof gebruik je, maakt deze de eiwitten niet kapot?





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures