checkvials problemen HPLC

Mies030

Ik mag niet hopen dat je een silica kolom gebruikt...

Volgens mij is behoorlijk algemeen bekend dat je silica oplost boven ph 7!!!

En ja, als de specificaties van je kolom al aangeven om niet boven pH 8 te gaan...

Ws. heb je je probleem gevonden. Alhoewel, of dit het vage gedrag van je check valves verklaart? Tenzij je seals in je pomp hebt zitten die deze pH ook niet aankunnen maar dat zal wel niet.

Omlaag brengen van de pH van je eluens zou chromatografisch (scheiding) problemen kunnen geven. Als dat zo is zou ik gewoon een andere kolom proberen die wel in dat pH gebied bruikbaar is.

Mischien dat de chekvials dan ook niet meer vast gaan plakken!!

Gebruik je een zout in je eluens, zo ja wat en hoeveel?

gr,

Mich@

harriel

Hoi,

Het iswel een silica kolom. Een symmetry Shield C18. Is mij niet bekend dat boven de 7 een gevaarlijk gebied is voor een silica kolom!! (Fijn als je nog niet veel weet, kun je lekker veel leren!)

Ik gebruik geheel geen zout in het elu.

Vanacht heeft het systeem nog gedraaid met het eluens met hoge ph. Vanmorgen was de druk weer iets aan het oplopen. Daar de analyse afgelopen was de proef gedaan met eluens met een lagere ph. Met 4 druppeltjes 1N HCl op een halve ltr eluens ging de ph al naar 3!!. Eluens aangesloten en de druk zakte meteen naar het nivo waar het altijd zit van 1500psi naar 1300psi.!! Dus dit is al heel hoopvol.

Daarna regelmatig een controle geprikt met Vitamine E acetate. Pas na ongeveer 5 uur inlopen was de kolom weer stabiel en kreeg ik reproduceerbare chromatogrammen. In de tussenliggende tijd was er geen piek te zien, of wazige glooiingen.

De uiteindelijke retentie tijd verschilt praktisch niets met het elu met hoge ph.

Ik vond het ongeloofelijk om te zien wat die paar druppeltjes HCl teweeg brengen in de kolom.

Wat is nu slim te doen? In pricipe wil ik bij deze kolom blijven daar de scheiding goed lijkt te zijn.

Het is moeilijk om een vaste ph voor het eluens te kiezen als deze al zo sterk reageer op een beetje zuur. Moet je in een dergerlijk geval kiezen voor een buffer??

Vandaag geen problemen meer gehad met de checkvials. \

Groetjes Harrie

Fuzzwood

Dan is een buffer inderdaad een goede optie. Sinds je met pH 3 goede resultaten krijgt, misschien daar ook op bufferen?

harriel

Hallo FsWd,

Wat voor buffer zou ik dan het beste kunnen gebruiken??

Zou het oplopen van de druk op deze kolom de oorzaak kunnen hebben in het feit dat het eluens te basisch is/was?? Als dat zo zou zijn vind ik dat toch een spectaculaire verklaring voor al de problemen die ik hiermee (hopelijk) heb gehad!!

Dat de checkvials vast gaan zitten / plakken in het basische gebied zou dat kunnen doordat er iets zeepachtigs onstaat waardoor het vastplakkengebeurd??

Ik roep maar wat!

Groetjes en bedankt voor alle steun

Fuzzwood

Daar laat ik mensen over die weten wat ze zeggen. Mijn antwoord was niets meer dan een conclusie van je verhaal.

Napoleon1981

Een ongebufferde mobiele fase is absoluut not done. Zonder buffer zal je nooit een reproduceerbare scheiding krijgen. Je kan inderdaad ook silica kolommen slopen met basische mobiele fasen. De kolom zal langzaam aan oplossen. Waarin vang je je eluens op? Neem eens heldere doorzichtige flessen en kijk of je een witte waas krijgt in je fles. Dit is dan silica uit je kolom.

Normaal gesproken probeer ik altijd te werken met water, acetonitriel en formicacid of trifluoroacitic acid (0.1%) dus een mililiter zuur per liter mobiele fase.

Wat de beste pH is hangt helemaal van je analyse af en welke componenten je moet scheiden.

Ik moet al zeggen dat er hele rare mobielen fasen aanbod zijn gekomen in dit topic waar ik maar geen vragen over gesteld heb, maar ik ben zeker benieuwd wat hier de wetenschappelijke verklaring naar is.

harriel

Hoi Napoleon,( Ik begon je al te missen )

Zou mijn probleem van het druk oplopen dan nog opgelost worden. Ik ga nu het oude eluens er weer opzetten en kijken of ik die waas krijg.

Als ik een eluens heb met slechts 6 % water moet dan de hoeveelheid formic acid niet berekend worden over deze 6% en niet over het gehele volume eluens??

Zou je voorstel zijn :

94% Acetenitrile

6% H2O met 0,1% Formic acid

Maar met alleen Formic acid heb ik toch nog geen buffer??

Hope to hear from you

Fuzzwood

Dat gaat natuurlijk over het hele eluens. Napoleon1981 vatte dat ook samen als 0,1 ml per liter eluens, niet per liter water

.

Mies030

Daar laat ik mensen over die weten wat ze zeggen. Mijn antwoord was niets meer dan een conclusie van je verhaal.

Haha heel netjes FsWd

Harrie, heb je überhaubt wel een chemische (LC) achtergrond? Mi. mis je een enorme (chemische)LC-basis wat je een hoop tijd, ergenis en geld had kunnen besparen.

Doe eens een basis HPLC cursus oid. Dat helpt je ws veel in de toekomst Afbeelding

Het begint er onderhand op te lijken dat we hier gezamelijk een methode voor je aan het ontwikkelen zijn. Mi. niet geheel het idee van het forum, toch? Afbeelding

Suc6

harriel

Ik voel me nu een beetje door de mand vallen. Maar wat waar is mag gezegt worden.

Ja mijn LC achtergrond zou ik ook graag op een hoger nivo hebben. Maar met z'n allen komen we ook een heel eind.

Het had inderdaad een hoop tijd en ergernis kunnen besparen.

Ik heb halverwege mijn leven een cariere switch gemaakt en heb in deze HPLC omgeving mijn werk mogen gaan doen, met erg veel plezier.

Je komt te werken met een methode die klaar lag en altijd goed voldaan heeft!!!??

Wie was ik om daar aan te twijvelen. Verder is er in mijn omgeving niemand die mij kan helpen.

Dus moet ik het doen met try and error. Vooral veel error.

Een goed idee om mijn theoretische kennis wat op te vijzelen. Ik heb wel wat boeken liggen die ik toch maar weer eens naar boven ga halen.

Maar iedereen erg bedankt voor de bijdrage

bteunissen

harriel schreef: Hoi Napoleon,( Ik begon je al te missen )

Zou mijn probleem van het druk oplopen dan nog opgelost worden. Ik ga nu het oude eluens er weer opzetten en kijken of ik die waas krijg.

Als ik een eluens heb met slechts 6 % water moet dan de hoeveelheid formic acid niet berekend worden over deze 6% en niet over het gehele volume eluens??

Zou je voorstel zijn :

94% Acetenitrile

6% H2O met 0,1% Formic acid

Maar met alleen Formic acid heb ik toch nog geen buffer??

Hope to hear from you

Het ligt er aan. Een combinatie van bijv methanol of acetonitrile met een formiaatbuffer kan genoeg zijn voor een stabiele chromatografie. Als je je eluens niet buffert en bijv 0.1% mierezuur toevoegd aan je waterfase dan wil dit nog wel eens verkeerd gaan als je naar hoge concentraties organische fase gaat tijdens je chromatografie. Als je elueerd met 90% organische fase dan heb je slechts 10% water/mierezuur fase over. Als dat de chromatografie van je compound slecht beïnvloed (door de weinig zure omgeving) dan kun je er voor kiezen om zowel je water- als je organische fase aan te zuren.

Napoleon1981

Als je flink in het zure gebied zit, dan heb je min of meer een buffer. Je pH zal niet snel veranderen. Kijk maar eens hoeveel moeite je moet doen om de pH van zoutzuur omhoog te brengen, terwijl dit geen buffer is in de klassieke zin van het woord.

Ik zelf werk met binaire systemen en voeg zowel mierezuur toe aan me acetonitriel (pomp B) en water (pomp A).

Maargoed, voor sommige scheidingen zijn andere pH waarden nodig of andere mobiele fasen vereist. Dit is de kunst die chromatografie heet en door niet heel veel mensen wordt begrepen. Je zult een goed idee moeten hebben van de chemie van een chromatografie kolom en van de physisch chemische parameters zoals pKa etc van je analiet. Alleen dan kun je methode ontwikkeling doen.

bteunissen

[...] Dit is de kunst die chromatografie heet en door niet heel veel mensen wordt begrepen. Je zult een goed idee moeten hebben van de chemie van een chromatografie kolom en van de physisch chemische parameters zoals pKa etc van je analiet [...]

een kunst is het zeker.

en een ó zo mooie! Afbeelding

harriel

Hoi Napoleon, en iedereen.

Ik ben een 10 dagen in de dolomieten geweest!

Inderdaad als ik het eluens aan moet zuren tot 3,5 dan gaat dat in het begin erg snel daarna moet je relatief veel toevoegen om het nog iets zuurder te krijgen.!! Dus in dat zure gebied heb ik eigenlijk al een buffer dat is duidelijk dank je.

Je zegt terecht denk ik dat een ongebufferd eluens absoluut not done is. Okee maar mijn eluens samenstelling heb ik in het begin van deze discussie al kenbaar gemaakt. Daar had dan al eerder een kritische opmerking over gemaakt mogen worden.

Maar ik ben natuurlijk toch erg blij dat we de vinger op de zere plek hebben kunnen krijgen.

Groetjes Harrie

Napoleon1981

Ik had het expres niet gezegd, omdat ik niet denk dat de ongebufferde eluens samenstelling plakkende checkvalves veroorzaakt. De discussie was opzich al lastig genoeg en ik wilde niet teveel onderwerpen tegelijk aanpakken. Verder kon ik ook de samenstelling van je eluens totaal niet rijmen en ik ging er vanuit dat je deze ergens vandaan gehaald had waar het kennelijk al probleemloos werkte. Gevalideerde methoden in de farmaceutische industrie zijn nog maar zeer moeilijk te veranderen.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC

Re: checkvials problemen HPLC