Springen naar inhoud

[scheikunde] Concentratie van een eiwit


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 mei 2008 - 02:27

Hallo

In mijn cursus, noch op het internet vind ik veel informatie over methodes om de concentratie van een eiwit te bepalen en de werkwijze.

De enige methode waar ik iets over terug vind, is de biureetmethode.
Maar ook daar heb ik toch nog enkele vragen bij:
=>Een oplossing bevat 3 mg (zuiver) eiwit per ml (bepaald met de Biureet methode). Het eiwit in kwestie bestaat uit 300 aminozuren.
Wat is concentratie van het eiwit na hitte danaturatie ?
Ik denk dat het antwoord op deze vraag vrij eenvoudig is, nl 3mg/mL
De biureetmethode steunt namelijk op het voorkomen van peptide-bindingen in de molecule. Door denaturatie verandert de ruimtelijke structuur, maar niet de bindingen.
=>Welke concentratie zal gemeten worden nadat elk aanwezig eiwitmolecule
in 3 stukken is geknipt?
Ik denk dat de concentratie nog steeds 3mg/mL is. Maar hier ben ik niet zeker van!
=>Welke concentratie zal gemeten worden nadat het eiwit zodanig wordt geknipt dat enkel de samenstellende aminozuren overblijven ?
Ik denk de gemeten concentratie hier gelijk zal zijn aan 0mg/mL want er komen geen peptidebindinen meer voor in de oplossing.
=>Men verdunt de oorspronkelijke oplossing 4 keer. De verdunde oplossing
wordt op zijn beurt 4 keer verdund enz. Wat is de concentratie na 3 maal deze procedure toegepast te hebben? [/I]
Ik denk dat het juiste antwoord 0,047 mg/mL is. (verdunningsfactor 4 -> 3/4³=0,047)

=>Zijn er nog andere manieren om de concentratie van een eiwit te bepalen ?
Zo ja, welke?

=> Is het steeds nodig om een ijklijn op te stellen?

Alvast hartelijk dank!
Manon

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

ceitwa

    ceitwa


  • >250 berichten
  • 365 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 26 mei 2008 - 07:10

paragon electroforese totaal eiwit hier worden de verschillende serumfracties gesplitst en als je dan de biureet ernaast legt kan je de concentratie van de verschillende eiwitten bepalen

#3

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 mei 2008 - 20:46

Zou iemand me nog een beetje verder kunnen helpen met mijn andere vragen?
Klopt mijn redenering of zit ik er helemaal naast?

Bedankt
Manon

#4

ceitwa

    ceitwa


  • >250 berichten
  • 365 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 31 mei 2008 - 21:13

ik denk dat je dit topic moet plaatsen onder biochemie als ik je vragen nog eens goed doorlees. Weet zelf de antwoorden ook niet heb alleen de vraag over andere methodes beantwoord maar dat was denk ik niet wat je bedoelde.

#5

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 mei 2008 - 21:23

Hartelijk dank! Ik ben niet helemaal zeker over de antwoorden op mijn andere vragen. Maar ik probeer het eens bij het Biochemie-topic. U wist me al een eindje verder te helpen. Mijn dank hiervoor!

Manon

#6

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 01 juni 2008 - 09:40

Je hoeft het zeker niet in een andere topic te zetten dat is niet nodig. Of wij verplaatsen de topic of hij blijft gewoon staan.
Het is gewoon een huiswerkvraag, dus ik laat hem hier gewoon in staan.

Op je vragen terug komen. Ik ben het er wel mee eens. De antwoorden kloppen volgens mij wel.
hier staat nog een methode beschreven.

MvG Ron

Veranderd door biochemiefreak, 01 juni 2008 - 09:48


#7

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 01 juni 2008 - 10:13

Even een paar opmerkingen.
Zuiver eiwit is een raar begrip, meestal is het een mengsel van verschillen de eiwitten.
Elk eiwit geeft met biureet in beginsel een andere extintie met als gevolg dat altijd een ijklijn nodig.
Het grootste probleem is je standaard die moet identiek zijn aan de samenstelling van je monster, in de praktijk betekend het dat er altijd een onbekende afwijking zit in je meting omdat de standaard en het monster geen identieke samenstelling hebben.
Er zijn diverse eiwitbepalingen geschikt voor verschillende matrixen.
De meest optimale methode is momenteel de immunochemische omdat deze in staat is specifieke eiwitten uit een eiwitmatrix redelijk nauwkeurig te kwantificeren.

#8

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 juni 2008 - 12:15

Excuses voor mijn dubbel-post-gedrag. Ik wist eventjes echt niet meer waar ik heen moest met mijn vraag. Welgemeende excuses.

Tijdens het practicum zouden we een ijklijn opstellen uitgaande van een BSA-oplossing.
Vervolgens zouden we een aantal verdunningen maken van een serum-staal (0,6mL konijnenserum). 0,5 mLvan elke verdunning zou gebruikt worden om de proteÔneconcentratie te bepalen. De proteÔneconcentratie zou worden bepaald dmv van de absorptiewaarden en de BSA-ijklijn. Maar we konden dit practicum niet doen. Daarom kregen we een theoretische vervangopdracht., waarin hij vraagt of het ECHT WEL nodig is om een ijklijn op te stellen om de concentratie van het eiwit te bepalen?

Maar ik snap het niet goed. Is er een mogelijkheid om zonder het opstellen van een ijklijn de concentratie van het eiwit te bepalen?

#9

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 03 juni 2008 - 17:54

Je hebt altijd een ijklijn nodig om de concentratie te bepalen, zelfs een factor die je soms gebruikt ziet worden is berekend uit een ijklijn.

#10

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 juni 2008 - 18:29

Mag ik vragen wat je bedoelt met die factor?

Bedankt

#11

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 03 juni 2008 - 18:39

Je kunt een liniaire ijklijn die door het nulpunt gaat beschrijven als de concentratie =factor x extinctie. Als de ijklijn stabiel is in verschillende meetreeksen dan hoef je voor verdere metingen geen ijklijn meer mee te nemen maar kun je gewoon met de factor werken. Vergelijk het maar met de molaire extinctiecoefficient.

#12

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 03 juni 2008 - 18:56

In beide gevallen is dat dus gewoon de helling van de lijn: y = ax + b, waarbij de b-term vervalt als de lijn door het 0-punt gaat.

#13

Manon X

    Manon X


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 06 juni 2008 - 22:28

Hartelijk bedankt!

Dus als ik het goed begrijp, dan heb je geen ijklijn nodig op voorwaarde dat je de factor als gegeven meekrijgt?

Is die factor voor alle eiwitten hetzelfde? Of is deze afhankelijk van het aantal peptidebindingen in het eiwit?

Waar ik nog steeds niet helemaal uit ben is, waarom we de ijklijn die we zouden opstellen met BSA zomaar ook mochten gebruiken om de concentratie van het konijnenserum te bepalen?
Het gaat hier toch over twee verschillende eiwitten? En dus bijgevolg ook over een verschillend aantal peptide-bindingen per eiwit?

Zoals ik het nu begrijp, zal iedere peptidebinding zorgen voor "meer kleuring". Als gegeven krijg ik dat het eiwit 300 aminozuren bevat (dus 299 peptidebindingen per eiwit), toch moet ik in mijn verdere redenering daar blijkbaar geen rekening meer mee houden. Of wel?

Bedankt. Heel veel.
Manon

#14

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 07 juni 2008 - 10:06

1 Ja
2 Nee, voor elk eiwit is er een eigen factor. Ja
3. BSA wordt vaak gebruikt als standaard gebruikt voor allerlei eiwit-ten,mengsels omdat BSA goed gestandariseerd is en makkelijk te verkrijgen. Een echt universele standaard voor konijnenserum (maar ook voor elk ander serum) kan niet worden gemaakt omdat het serum van elk konijn anders van samenstelling is (denk maar aan de immunoglobulinen)
4 Nee, bovendien is het resultaat niet in mol/li maar in g/l dat betekent ook dat je meestal niet kunt weten hoeveel eiwitmoleculen in de oplossing zitten omdat de molmassa niet exact bekend is. In een serum is het nog erger want daar ken je de samenstelling van de eiwitten niet, hooguit bij benadering.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures