Springen naar inhoud

positieve controle actine


  • Log in om te kunnen reageren

#1

placebo

    placebo


  • >250 berichten
  • 660 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 29 mei 2008 - 15:14

hoi,

ik ga een RT-PCR uitvoeren (reverse transcriptase) nu doe ik vooraf de reverse transcriptase reactie volgens het onderstaande protocol. De bedoeling is dat ik actine als positieve controle meeneem. Maar waarom ?? (de ? voor L endergelijke is micro)

• maak mastermix (ter voorbereiding):
- 2 L 10x Reaction buffer
- 4 L MgCl2 (25 mM)
- 2 L dNTP"s (10 mM)
- 2 L Oligo-p(dT)15 primer (0,8 g/L)
- 1 L RNase
- 0,8 L AMV reverse transcriptase

• los 0,2 g RNA op in 8,2 L H2O

• incubeer 5 min op 65°C

• meng (d.m.v. het draaien van de buis)

• plaats op ijs

• voeg 11,8 L mastermix toe

• incubeer 10 min op kamertemperatuur

• incubeer 60 min op 42°C

• incubeer 5 min op 99°C

• afkoelen tot 4°C

• incubeer 5 min op 4°C

• bewaar op 4°C (1-2 uur), of -20°C (langere periode)

Veranderd door Placebo, 29 mei 2008 - 15:15


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 29 mei 2008 - 17:49

Actine is een huishoudgen. Dat wil zeggen dat de expressie levels van dit gen altijd constant is, dus kun je je targetgen goed controleren in vergelijking met dit gen. meer info

MvG Ron

#3

placebo

    placebo


  • >250 berichten
  • 660 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 30 mei 2008 - 12:55

oke bedankt :)





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures