positieve controle actine

Moderator: ArcherBarry

Reageer

Bericht 29-05-'08, 16:14

placebo

Berichten: 660

positieve controle actine

hoi,

ik ga een RT-PCR uitvoeren (reverse transcriptase) nu doe ik vooraf de reverse transcriptase reactie volgens het onderstaande protocol. De bedoeling is dat ik actine als positieve controle meeneem. Maar waarom ?? (de ? voor L endergelijke is micro)

• maak mastermix (ter voorbereiding):

- 2 L 10x Reaction buffer

- 4 L MgCl2 (25 mM)

- 2 L dNTP"s (10 mM)

- 2 L Oligo-p(dT)15 primer (0,8 g/L)

- 1 L RNase

- 0,8 L AMV reverse transcriptase

• los 0,2 g RNA op in 8,2 L H2O

• incubeer 5 min op 65°C

• meng (d.m.v. het draaien van de buis)

• plaats op ijs

• voeg 11,8 L mastermix toe

• incubeer 10 min op kamertemperatuur

• incubeer 60 min op 42°C

• incubeer 5 min op 99°C

• afkoelen tot 4°C

• incubeer 5 min op 4°C

• bewaar op 4°C (1-2 uur), of -20°C (langere periode)
Omhoog

Bericht 29-05-'08, 18:49

biochemiefreak

Gebruikersavatar
Berichten: 2.330

Re: positieve controle actine

Actine is een huishoudgen. Dat wil zeggen dat de expressie levels van dit gen altijd constant is, dus kun je je targetgen goed controleren in vergelijking met dit gen. meer info

MvG Ron
Omhoog

Bericht 30-05-'08, 13:55

placebo

Berichten: 660

Re: positieve controle actine

oke bedankt :)
Omhoog
Reageer

Terug naar “Moleculaire biologie en biochemie”