Springen naar inhoud

Twijfeling over elutie te scheiden componenten


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 juni 2008 - 18:14

Hallo allemaal,

vandaag ben ik op school bezig geweest met een nieuwe HPLC. Deze werkt uit de kunst alleen zit ik met een probleempje. Ik moest de concentratie van benzoŽzuur en caffeÔne in cola bepalen. Hiervoor heb ik een ijklijn opgesteld van een aantal standaarden. Zoals verwacht geeft de HPLC netjes 2 pieken (en 2 kleintjes maar die zijn bijna niet te zien), alleen nu vraag ik mij af; welk component verlaat de kolom eerder (RP C18 kolom), het benzoŽzuur of de caffeÔne?

Het eluens bestaat uit methanol met een fosforbuffer die het eluens naar pH = 3,5 brengt. Zelf dacht ik dat caffeÔne als eerste de kolom verlaat omdat deze basische eigenschappen heeft en misschien een H'tje van het zuur opneemt en daardoor een lading krijgt en dus polair wordt. Dit weet ik echter niet zeker, vandaar mijn vraag :P

Bij voorbaat dank!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 19 juni 2008 - 19:19

Heb je niet even een monster met een andere verhouding laten lopen? :P

#3

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 juni 2008 - 22:18

Die vraagt roept alleen maar meer vraagtekens bij mij op :oops: :P

De verhouding methanol/buffer was 45%/55% en het was een isocratische elutie.

#4

Vreggie

    Vreggie


  • >250 berichten
  • 540 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 juni 2008 - 22:37

nou rwwh bedoelt heb je niet een monster mee gespoten met alleen caffeine of alleen benzoezuur. Dan had je het zo kunnen bepalen

#5

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2008 - 06:40

Je redenatie is goed, maar je had natuurlijk de componenten even individueel moeten injecteren. Of je daarwerkelijk gelijk hebt, is niet te zeggen.

#6

keyzplayer

    keyzplayer


  • >100 berichten
  • 115 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2008 - 09:52

Zelf dacht ik dat caffeÔne als eerste de kolom verlaat omdat deze basische eigenschappen heeft en misschien een H'tje van het zuur opneemt en daardoor een lading krijgt en dus polair wordt.


Bij reversed phase HPLC (althans zonder ion-pairing) wil je juist geen lading op je analiet. Dat geeft nl. enorme tailing.

Veranderd door keyzplayer, 20 juni 2008 - 09:52


#7

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2008 - 14:40

Hmm, er is geen gebruik gemaakt van ion-pairing. Mijn leraar vertelde mij dat ik naar een bepaalde K moest zoeken ofzo 8-[

#8

Vreggie

    Vreggie


  • >250 berichten
  • 540 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2008 - 14:52

Ik denk dat je docent de Pka waarde bedoelt. Maar zelfs dan is het niet zeker. Ik zou als ik jouw was gewoon een oplossing met caffeine maken en dan kijken wat de retentietijd hiervan is. Dan weet je het in ieder geval zeker

#9

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2008 - 21:21

Ik denk dat ik dat maar ga doen dan :D

Bedankt voor het advies 8-)

#10

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juni 2008 - 16:03

Zelf dacht ik dat caffeÔne als eerste de kolom verlaat omdat deze basische eigenschappen heeft en misschien een H'tje van het zuur opneemt en daardoor een lading krijgt en dus polair wordt.


Bij reversed phase HPLC (althans zonder ion-pairing) wil je juist geen lading op je analiet. Dat geeft nl. enorme tailing.

Dat is lang niet altijd waar, en in het geval van veel basen ontkom je niet aan protonatie van een amine. Het is dan beter om een zure mobiele fase te hebben en zo de tailing tegen te gaan, ipv basisch gaan en je kolom op te lossen.

K waarde is een retentie factor en geen pKa. De K waarde kun je berekenen. Maargoed een vraag die je inderdaad zult moeten beantwoorden is..... Wat is de pKa van caffeine en is het daadwerkelijk geladen? :P

#11

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juni 2008 - 19:58

Ja.......allemaal veel te lastig :D Ik laat wel even een oplossing met een kleine concentratie caffeÔne door de kolom lopen en kijken wanneer die eruit komt 8-)

#12

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 21 juni 2008 - 20:43

Niet als je je erin verdiept, en dat zegt iemand die ook een chemlvl 5 heeft, dus waarom zou jij het niet kunnen? :). Lastig = ik ben lui? :P

De pKa van caffeine vind je gewoon op dit forum. Wat betekent het als die boven/onder je ingestelde pH ligt?

Veranderd door FsWd, 21 juni 2008 - 20:50


#13

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juni 2008 - 21:56

Dat zou ik op dit moment niet durven zeggen...... :P

Ik vond dat wanneer de pH 2 waarden hoger ligt dan de pKa het stofje dan compleet ongeioniseerd is (dat was voor een base, misschien voor een zuur anders?)

Veranderd door Mark J, 21 juni 2008 - 22:07


#14

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 21 juni 2008 - 23:41

Over ionisatie kan ik je dit zeggen, een amine is ook een base, maar die wordt juist positief als deze geprotoneerd wordt. Ik denk dat met het regeltje bedoeld wordt dat een stof helemaal geprotoneerd is als de pKa van deze 2 waarden boven de pH ligt. Voor een zuur zal dat omgekeerd zijn, die zal volledig gedeprotoneerd zijn wanneer de pH 2 punten boven de pKa ligt.

Als je nu de pKa van caffeine weet (10,5 die geef ik je maar cadeau :P ), dan betekent dat dus dat deze in de buffer geladen zal zijn, en dus als eerste uit de kolom zal komen. Zo zie je dat met een beetje redeneren weer wat chemicalien bespaard zijn :P. Of je test deze theorie even door caffeine toch even apart te runnen. Kun je weer een leuke deelredenering + conclusie in je verslag opnemen :)

Veranderd door FsWd, 21 juni 2008 - 23:44


#15

Mark J

    Mark J


  • >100 berichten
  • 243 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 juni 2008 - 21:07

Aha, weer wat geleerd. Dus in het kort, wanneer van een stof de pKa (veel) hoger ligt dan de pH van mijn loopvloeistof, dan is deze geprotoneerd (dus een lading heeft) en als eerste mijn apolaire kolom verlaat.

Bedankt! :D





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures