Springen naar inhoud

Bepalen van malaat concentratie in planten.


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Brambeer

    Brambeer


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 11 juli 2008 - 11:27

Ik wil graag de malaat concentratie in CAM planten meten, als indicator voor de opslag van CO2 in het donker en de afbraak daarvan in het licht.

Ik pas het liefst een non-destructieve methode toe door met een naaldje een erg klein volume op te zuigen, maar daar kun je echt alleen maar hele kleine volumes mee monsteren. Maar als dat niet helemaal werkt zou ik ook nog over kunnen stappen op weefselkweek van kleine stukjes plant, en die vermalen en daarmee verder meten.
Alleen weet ik niet wat een goede samenstelling is voor en plantenvoedingsbodem.

De meest nauwkeurige methode lijkt me met een spectro/calorimeter(ik weet niet of er een verschil is tussen die 2). Heeft iemand een indicatie van het absorptiespectrum van malaat, en of ik hier wel een gewone spectrofotometer(Ik kan niet echt boven de 200 Euro) voor kan gebruiken. En ik heb dan toch ook een stofje nodig die malaat weg kan vangen om een goede 0 absorptie te kiezen?

Omdat malaat een zuur is heeft het ook invloed op de pH, en zou ik ook de (relatieve) malaat concentratie aan de hand van pH kunnen bepalen. Het probleem hierbij is dat er met een injectienaald echt maar heel weinig vloeistof(net aan een druppel) onttrokken kan worden. En een gewone pH meter dus niet werkt. Weet iemand nog handige pH meters die je in de plant zelf kan steken?(het hoeft niet in een blad dus het hoeft ook weer niet microscopisch klein te zijn).
Of is er ook een methode om het te verdunnen en terug te rekenen?
pH testpapier is natuurlijk ook een optie, maar minder nauwkeurig en minder fijn voor een kleurenblinde als ik af te lezen.


Het spijt me dat het een beetje onduidelijk wordt door het grote aantal vragen. maar met elk antwoord ben ik stukken verder.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 11 juli 2008 - 13:03

Een enzymatische malaat bepaling maar ik zou met google zoeken "malate assay" bijna 400.000 hits.

L-malic acid assay
The L-malic acid was measured in fruit juices and wine by measuring the reduced derivatives (formazan)of an artificial electron acceptor (MTT). The following reaction mixture was used: 100 mL of 25 mg/mL of NAD+, 100 mL of 600 mM MTT dissolved in phosphate buffered saline (PBS, pH=7.4), 1 mL of 100 mM PMS dissolved in PBS, 40 mL of sample, 759 mL of 0.1 M glycine/NaOH buffer (pH=9.7). A volume of 0.30 mL of aliquot was taken from the mixture and added to 0.26
mL of 0.1 M glycine/NaOH buffer (pH=9.7) and 40 mL of the enzyme preparation (a total of around 32 mU/mg protein) to start the reaction. This mixture was incubated for 30 min at 40 C, and the reaction was interrupted by the addition of 0.6 mL of a solution containing 50 % dimethylformamide and 20 % sodium dodecyl
sulphate (DMF/SDS). The colour developed was measured at a test wavelength of 570 nm using a reference wavelength of 655 nm.

Bron: http://hrcak.srce.hr/file/38491
Toevoeging
MTT http://en.wikipedia.org/wiki/MTT_assay

Veranderd door Gerard, 11 juli 2008 - 16:30


#3

Brambeer

    Brambeer


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 19 augustus 2008 - 12:23

Hmm dat gaat lastig worden zonder lab en maar weinig lab ervaring.

Ik zoek eigenlijk naar een iets overzichtelijkere manier. En ik denk dat dat met pH meting wel wat makkelijker is.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures