Springen naar inhoud

Enzymkinetiek mbv AF


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 27 oktober 2008 - 18:25

Hoi,

Mijn vraag is; Hoe ik krijg ik V uit mijn gegevens?

De bedoeling is dat we de Km hieruit krijgen, dit snap ik allemaal wel (denk ik), de vraag is om deze grafiek te krijgen moet je 1/Vo uitzetten tegen [S]

Mijn resultaten zijn als volgt:

Activiteit in onverdunde monster AF= 0,3177

Nu heb ik verschillende substraatconcentraties gemaakt (mmol/liter), hiervan voeg ik 1 ml substraat en 0,1 ml enzymoplossing toe
Hier meet ik de A/min bij 405 nm
Resultaten:
Verschillende substraatconcentraties met A/min:
13,3 0,4324
6,66 0,2777
4 0, 1921
2,66 0,1350
1,33 0, 0749
0,8 0,0542
0,5 0,0337

Ik weet nu niet hoe ik tot de grafiek (reactiesnelheid Vo in U/L tegen substraatconcentratie (mM) uit moet tekenen, kan iemand mij helpen?
Na deze grafiek moet ik ook nog de Km bepalen en een conclusie hieruit trekken!

Als jullie meer informatie nodig hebben of een simpele formule geven that can do the trick, alvast bedankt! Het gaat me dus om de Vo..

Groetjes

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Marjanne

    Marjanne


  • >1k berichten
  • 4771 berichten
  • VIP

Geplaatst op 28 oktober 2008 - 12:46

Ik (en ik vermoed ook anderen) heb eerlijk gezegd geen idee waar je het over hebt...

Wat is V?
Wat is Vo?
Km?
A/min?
[S]?

Kun je iets meer beschrijven wat je nu hebt gedaan en waarom?

#3

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 28 oktober 2008 - 14:09

De enzymatische omzetting van p-nitrofenylfosfaat (pnp) naar p-nitrofenol door AF kan gevolgd worden door het meten van de toename van de concentratie p-nitrofenol, deze heeft bij 405 nm een absorptiespectrum.
Met dit practicum moeten we 2 factoren op de activiteit van AF onderzoeken (2 factoren = enzymconcentratie en substraatconcentratie)
In alle gevallen dient uit het extinctieverloop bij 405 nm de reactiesnelheid (activiteit) te worden berekend.
Om factor 2 te onderzoeken maken we verschillende concentraties van pnp (zie vorige bericht), deze geven verschillende A-waarden met de spectrofotometer.

Nu is de opdracht om uit deze waarden de reactiesnelheden uit te zetten tegen de substraatconcentraties, de concentraties zijn bekend. (dit is de 1e grafiek=stijgende lijn die afloopt (horizontaal) naarmate de substraatconcentratie hoger wordt)

Uit de 1e grafiek moeten we een Michalis-Menten vergelijking opstellen (2e grafiek= rechte lijn)

1e grafiek:
V = Y-as
1/2Vmax=hieruit kun je op de X-as de Km waarde bepalen
X-as= substraatconcentraties =[S]

2e grafiek:
1/V= Y-as
1/[S]= X-as

Bepaal uit beide grafieken de maximale beginsnelheid van de reactie en de Michalis-Constante.

Hoop dat het wat duidelijker wordt.. Ik weet gewoon niet hoe ik bij die snelheid kom!

Veranderd door DrieCh, 28 oktober 2008 - 14:18


#4

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 28 oktober 2008 - 15:47

Uiteindelijk wil je een lineair verband kunnen opstellen. De richtingscoŽfficitent van die lijn, samen met de transformaties die je aan de x hebt moeten doen, kunnen je dan het juiste antwoord geven.

#5

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 28 oktober 2008 - 20:36

Ja klopt, de 2e grafiek wordt een rechte lijn.. Maar ik moet eerst de V-waarde hebben voor mijn 1e grafiek, ik weet niet hoe ik hieraan kom of dat ik gewoon een simpele formule moet invullen om deze te krijgen..

#6

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 29 oktober 2008 - 17:02

ik hoop echt dat iemand het mij kan vertellen..





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures