Springen naar inhoud

transfer buffer (blotting van eiwitten)


  • Log in om te kunnen reageren

#1

ccc

    ccc


  • >100 berichten
  • 211 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 november 2008 - 20:50

Hey,

Wat me dwarszit: waarom was men de gel in de transferbuffer? Men moest die 2 keer wassen. Ook moesten we een roervlo in de buffertank steken. Waarom??

Hopelijk dat iemand me kan helpen.

Alvast bedankt

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 12 november 2008 - 21:22

Ik denk dat je het hebt over elektroblotten na PAGE, geef dit alle informatie bij je vragen dat maakt het makkelijker om te helpen.
Waarom de gel gespoeld wordt weet ik niet, ik denk om electroforesebuffer te verwijderen om geen verschillende geleidende stukken in je gel te krijgen.
De roervlo dient om de buffer in beweging te houden om een goede en gelijkmatige warmteafvoer te verkrijgen

Veranderd door Gerard, 12 november 2008 - 21:23


#3

ccc

    ccc


  • >100 berichten
  • 211 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 november 2008 - 21:53

Eerst hebben we SDS-PAGE uitgevoerd dat we daarna gingen blotten.

gelsandwiche:

Waarvoor dient die spons en filtreerpapier? We moesten een sandwiche maken. Ik weet wel dat de we telkens met transferbuffer moesten bevochtigen. Ik dacht aan absorptie? Maar ben niet zeker

Wat bevat die nitrocellulosemembraan waardoor het blotten lukt?

Alvast bedankt

Veranderd door ccc, 12 november 2008 - 21:53


#4

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 12 november 2008 - 22:40

De spons en het filtreerpapier zijn een soort steunen om de gel voor inzakken te behoeden. Het bevochtigen gaat om de lucht uit het papier en de spons teverwijderen zodat er een een mooi egaal elektrisch veld onstaat om de eiwitten in dezelfde positie te houden.
Het membraam heeft zulke kleine porieen dat er geen eiwitten door heen kunnen en de eiwitten hechten zich op het oppervlak

#5

ccc

    ccc


  • >100 berichten
  • 211 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 23 november 2008 - 17:03

Ah, ik begrijp het.

Nog 1 vraagje:

We moesten stalen laden. Daarvoor hebben we de gekleurde low range , ongekleurde low range, gekleurde high range, ongekleurde broad range en ongekleurde high range gebruikt. De onbekende staal was ovalbumine.

Waarvoor dienen die gekleurde en ongekleurde range? Ik heb een aantal bandjes gekregen, maar weet het MGW niet van de ongekleurde range + gekleurde range.

Kan iemand mij helpen?

Alvast bedankt

#6

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 23 november 2008 - 19:11

Ik vermoed dat je het hebt over molecular weight markers waarmee je de grootte van je onbekende eiwitten kunt schatten.
Gekleurde markers zijn gemakkelijker in gebruik en je kunt de elektroforese goed volgen.
Welke range je gebruikt hangt af van welke gel je hebt gemaakt om optimaal de grootte te kunnen schatten.

Misschien kun je de waarden van de markers achterhalen als je de leverancier kent, ze staan bijna altijd op de website.

#7

ccc

    ccc


  • >100 berichten
  • 211 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 november 2008 - 20:05

polyacrylamide gel: 7,5% en 12%

#8

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 25 november 2008 - 20:22

Hoe kleiner de te scheiden eiwitten des te hoger het percentage.
Maar wat heeft het van doen met je MWMérs

#9

ccc

    ccc


  • >100 berichten
  • 211 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 november 2008 - 16:55

Men moet de onbekende staal via de ongekleurde low range en ongekleurde high range bepalen.

Via de ijklijnmethode: moet men 45KDa voor ovalbumine bekomen.
Maar mijn waarden wijken af van die 45 KDa.

Hoe komt dat?

#10

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 30 november 2008 - 12:47

Ik beschouw de markers als een indicator voor de grootte omdat zelfs al heb je perfect je eiwitten gedenatureerd en van SDS voorzien dan nog blijven er kleine verschillen in vorm waardoor er kleine verschillen in loopafstand ontstaan.
De ijklijnmethode is aardig maar in mijn opinie suggereert ze een mate van betrouwbaarheid die niet waar te maken is, in ieder geval bij mij niet er blijven verschillen tussen de waarden die ik vindt en de bekende grootte van eiwitten.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures