Ik ben bezig met een experiment om het fluoresceine gehalte in zo'n gele marker te bepalen', met behulp van UV/VIS, HPLC en titratie.
Nu heb ik informatie over fluoresceine opgezocht op acros.be, maar ik begrijp niet wat ze bedoelen met 'Optimum lasing bij < 545 nm (in basic CH3OH)' 8-[
Ook moet ik de optimale pH waarde bepalen (met de titratie) voor de fluorescentie van de fluoresceine. Nou heb ik op wikipedia het volgende gevonden: "Fluorescein has a pKa of 6.4 and its ionization equilibrium leads to pH-dependent absorption and emission over the range of 5 to 9" Dit betekend dan toch dat de optimale pH voor de fluorescentie tussen die 5 en 9 ligt?
Fluoresceine kan worden gebruikt in een bepaalde vorm van lasers. De emissie in methanol zal wel bij 545 nm liggen (een geelgroene kleur) en alleen als de input belichting van het laser-device een golflengte heeft kleiner dan 545 kan er emissie plaats vinden. Fluoresceine werkt nl. door een foton met een kleine golflengte (hogere energie) te absorberen en dan een foton met een heel specifieke golflengte uit te zenden. Het verschil in energie wordt omgezet in trillingen in het molecuul (dus warmte). Dus, stop er bijv. blauw licht in en er komt groen licht uit (blauw licht is kortgolviger dan groen licht). Als je er geel of rood licht in stopt, dan zal er geen fluorescentie plaats vinden.
Fluoresceine is maar matig fluorescerend bij een lage pH (dan komt het als molecuul voor), het eenwaardige ion komt vooral voor tussen pH=5 en pH=9 en daarboven vooral het tweewaardige ion. Het laatste ion geeft de beste fluorescentie. Dus, tussen pH=5 en pH=9 zal de fluorescentie langzaam oplopen met het oplopen van de pH, daarboven zal de fluorescentie vrijwel constant zijn. Dus, neem een pH van 10 of 11 en je hebt een constante en hoge fluorescentie.
Om jouw opdracht goed te kunnen doen zou je de florescentie sterkte moeten bepalen bij een bepaalde input-golflengte van een zelf samengestelde fluoresceine oplossing van bekende concentratie en bekende pH. Vervolgens vergelijk je je oplossing uit die stift.
dankjewel! nu snap ik die info een stuk beter We doen het experiment inderdaad zoals je het hierboven beschreven hebt. Nu maar hopen dat ik het allemaal mooi in mn verslagje krijg
