hallo
Wij moeten als project het GFP gen opzuiveren uit een E.coli bacterie. We hebben reeds schudculturen aangemaakt en nadien gecentrifugeerd. De bekomen pellets zitten nu in de dieprvies.
De opdracht is dus om GFP uit de plasmide van E. coli te halen en op te zuiveren.
Ik dacht dat dit misschien gewoon kon door omgekeerd te werk te gaan als bij het transformeren van de E. coli bacterie.
Nu weet iemand soms een site of zoekmachine die mij verder op weg kan helpen om een degelijke procedure samen te stellen
Alvast dank
Laatste berichten
-
10:45
Casus uit de praktijk: positief test THC 17
-
23:58
speciale rel. theorie 4
-
22:24
Ervaringen met "herontdekkingen" 3
-
17:43
Vreemde stank in huis 11
-
16:38
3 vragen over mijn rooskleurige r.berekening H2netGekoppeldeHBrflowbatterij.
-
17 apr
Interpretatie reactie-energie 3
-
17 apr
Logistic equation (Pierre Verhulst,Belgian Mathematician) 5
-
16 apr
vB 9
-
15 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 1
-
15 apr
Python: sockets sluiten 4
-
14 apr
Een eenvoudige logische redenering waarom tijd niet kan bestaan 'daarbuiten' 6
-
14 apr
Hoe kun je op quantumwijze getallen vinden in een rij die kleiner zijn dan getal k 3
-
13 apr
Rotatie van het heelal 22
-
13 apr
Documentenverdwijnen uit onedrive 1
-
12 apr
Behoud van impulsmoment en energie 5
-
12 apr
INLOG STORING / TIPS 4
-
09 apr
[natuurkunde] systeemgrafen 1
-
05 apr
afbuiging licht rond zware objecten via grondbeginselen relativiteitstheorie 490
-
05 apr
Ongepaste reclame 179
-
04 apr
Gegevens wissen mobiel 6
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
GFP opzuiveren
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 740
Re: GFP opzuiveren
Als je het DNA wilt opzuiveren, zoek dan op plasmid purification op google of op
protocol-online.org
http://www.protocol-online.org/prot/Molecu...__Purification/
protocol-online.org
http://www.protocol-online.org/prot/Molecu...__Purification/
-
- Berichten: 516
Re: GFP opzuiveren
Aangezien een natuurlijk E. coli niet in staat is om het GFP te produceren, hebben jullie dat er zelf ingestoken d.m.v. een plasmide. Je hebt restrictieknipplaatsen gebruikt om het GFPconstruct in de plasmidevector te krijgen, dus de kans is groot dat je dezelfde restricteknipplaatsen nu kan gebruiken om het stukje DNA er weer uit te knippen. En dan met PCR vermenigvuldigen zodat je een opzuivering krijgt.
-
- Berichten: 740
Re: GFP opzuiveren
@ Pink Panther
E.coli kan wel degelijk GFP tot expressie brengen als je de juiste promoter gebruikt. De expressie waarden zijn zelfs zo hoog dat je kolonies groen worden zonder ze aan te stralen met blauw licht.
E.coli kan wel degelijk GFP tot expressie brengen als je de juiste promoter gebruikt. De expressie waarden zijn zelfs zo hoog dat je kolonies groen worden zonder ze aan te stralen met blauw licht.
-
- Berichten: 5
Re: GFP opzuiveren
Ik snap wel niet waarom je een e coli zou transformeren met het GFP gen om het daarna weer uit te zuiveren.
Je kan toch ook gewoon van de eerste keer PCR doen.
Ik zou denk dat men een GFP gen in E coli zou brengen om daarna het GFP eiwit eruit te zuiveren.
Maar ja, ik weet natuurlijk niet wat de proef exact is.
Je kan toch ook gewoon van de eerste keer PCR doen.
Ik zou denk dat men een GFP gen in E coli zou brengen om daarna het GFP eiwit eruit te zuiveren.
Maar ja, ik weet natuurlijk niet wat de proef exact is.
-
- Berichten: 516
Re: GFP opzuiveren
@ Roy van Heesbeen
Ja, tuurlijk kan E. coli het GFP ter expressie brengen, als je maar de juiste promotor er aan hangt. Maar ik bedoelde dat er voor zover ik weet geen stammen van E. coli zijn die van nature een GFP-gen hebben (dus zonder dat de mens het erin gestoken heeft).
Want dat is nu juist wat je wil bereiken, hoe groener de kolonie ziet, hoe meer GFP (en dus ook hoe meer product van het gekoppeld gen, wat je wil onderzoeken) er gemaakt wordt. Als de E. coli van nature ook een secundair GFP-gen zou bevatten, zou je ook die opnemen in je meting en natuurlijk een zware overschatting maken van het expressieniveau van het gekoppeld gen.
Ja, tuurlijk kan E. coli het GFP ter expressie brengen, als je maar de juiste promotor er aan hangt. Maar ik bedoelde dat er voor zover ik weet geen stammen van E. coli zijn die van nature een GFP-gen hebben (dus zonder dat de mens het erin gestoken heeft).
Want dat is nu juist wat je wil bereiken, hoe groener de kolonie ziet, hoe meer GFP (en dus ook hoe meer product van het gekoppeld gen, wat je wil onderzoeken) er gemaakt wordt. Als de E. coli van nature ook een secundair GFP-gen zou bevatten, zou je ook die opnemen in je meting en natuurlijk een zware overschatting maken van het expressieniveau van het gekoppeld gen.
