Springen naar inhoud

Blanco


  • Log in om te kunnen reageren

#1

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 april 2009 - 15:38

Hallo,
We hanteren bij ons op het lab enkele HPLC methodes waarbij als je een blanco injecteerd toch een piekje of soms een dalletje krijgt. De blanco bestaat uit het gebruikte (RO)water. Zelfs als we dan HPLC grade water injecteren krijgen we deze piekje of dalletjes. Deze zijn reproduceerbaar.
Het zijn natuurlijk geen grote pieken maar als je een methode wilt optimaliseren zijn ze wel storend.
Ze komen wel ruim na het injectie punt.
Het spoelwater is ook al ververst.
Wat zou dit kunnen zijn? Zou dit een effect kunnen zijn van een wat oudere kolom?
Groetjes Harrie

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 08 april 2009 - 16:39

Puur HPLC water zal van een andere samenstelling zijn dan je mobiele fase, ook dat zal je UV detector oppikken.

#3

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 april 2009 - 07:09

Zo'n piek-dalletje is je injectiepiek. Die zie je bijna altijd en is het gevolg van, zoals Fuzzwood al zegt, een verschil tussen je injectieoplossing en mobiele fase.

Echter, ik lees:

Ze komen wel ruim na het injectie punt.

Wat bedoel je met "ze"? (Meerdere van die pieken per injectie?)
Wat is "ruim"? Een paar minuten?
Wat zijn je kolomdimensies en flow?
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#4

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 april 2009 - 15:02

Dat het injectie punt zichtbaar is bij HPLC water dat is helder. Dit ligt dan bijvoorbeeld op 1,5 minuten maar op 5 min krijg ik een piekje en op 8 minuten bijvoorbeeld een dalletje.
Kolom 3,9 x 150 mm flow 1,5.
Als ik de flow bijvoorbeeld verdubbel worden alle tijden van injectie punt en het ander piekje en het dalletje de helft.
Als ik de spoel vloeistof injecteer krijg ik dezelfde piekjes maar niet extreem groter!
Het komt dus ook niet van de spoelvloeistof af.
Groetjes Harrie

#5

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 april 2009 - 07:20

Dat is wel vreemd ja. Waaruit bestaan je mobiele fase en spoelvloeistof?

5 en 8 minuten is veel te lang voor een onvertraagde component. Er is dus interactie met de stationaire fase. Ik kan bijna niet anders dan concluderen dat je water vervuild is....Probeer eens een andere fles HPLC grade water (of neem milli-Q of demin water (vers!)).
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#6

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 13 april 2009 - 07:58

Hoi,
Ik heb al verschillende soorten HPLC water geprobeerd maar blijf de zelfde piekjes krijgen, ook HPLC grade!. Ik ben ervan overtuigd dat de piekjes niet van het water komen maar zou ook niet weten waarvan dan wel?
Als ik het injectievolume vergroot bijvoorbeeld van 10 naar 100 Uml dan worden de piekjes wel groter maar niet met de factor 10. Volgens mij ongeveer met een faktor 4 a 5 maar dat zou ik terugmoeten zoeken.
Groetjes Harrie

#7

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 14 april 2009 - 06:58

Je post beetje bij beetje informatie maar nog niet helemaal volledig. Probeer eens wat uitgebreider te zijn, zoals:
Wat is je mobiele fase?
Wat is je spoelvloeistof?
Wat is je stationaire fase? ==> Oftewel, wat is je methode?

Dat de bijpiekjes niet met een factor 10 groter worden, heb je het dan over area of height?
Blijven de piekjes na een paar injecties even hoog?
Injecteer je een monster, of alleen een blanco?
Is het chromatogram voor de rest (dus buiten de piekjes om) normaal?
Welke golflengte?

Veranderd door Raspoetin, 14 april 2009 - 06:59

I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#8

Anestro

    Anestro


  • 0 - 25 berichten
  • 11 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 april 2009 - 11:13

Hoe zit het met je kolom eigenlijk. Wat voor soort kolom is het ? Is die kolom al eens eerder gebruikt ? Hoe oud is die kolom?
Ik heb zelf het vermoeden dat het waarschijnlijk aan de kolom ligt.

#9

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 mei 2009 - 08:41

Hallo,
Tijdje op vakantie geweest,
Sorry dat ik niet reageer op jullie vragen over soorten kolommen en eluens. Dit is omdat het optreed bij meerdere analyses en dus niet echt relavant is. Het zijn wel RF kolommen.
Gisteren hadden we weer een analyse waarbij we in de blanco(HPLC-water) een piek hadden op 6 minuten. In 3 verschillende soorten vialtjes en 3 verschillende soorten water in alle zat deze piek.
Vooral als je moet gaan meten tegen het kwantificatie nivo geeft een dergelijk piekje ontzettend veel problemen.
Weer een reeks gedaan met oplopend injectie volume van 10 naar 100 microltr. Injecteer je het 5 dubblele dan gaat de area maar met een factor 2 omhoog Mij lijkt dit een heel belangrijke conclusie om dit verschijnlsel ooit te verklaren of op te lossen.
We hebben eigenlijk bij ons weten alles geprobeerd om het probleem op te lossen. Te weten:
Nieuwe kolom: geen effect
Hele probleem gespoeld en gereinigt: geen effect
Spoelvloeistof vervangen door eluens: geen effect
Ander soort vialtjes: geen effect

Bij ons op het lab is het gebruikelijk om voor iedere analyse een fles te hebben met eluens voor deze analyse. Gaan we de betreffende analyse doen dan pakken we deze fles en kijken of er nog genoeg vloeistof in zit om de geplande analyse uit te voeren. Zo niet dan maken we 2 ltr nieuw eluens en schudden de fles weer vol.
Het kan dus zijn dat er bij de flessen eluens zit wat 4 jaar geleden is gemaakt.
Iemand waarmee we het over dit probleem hadden vond dit een vreemde gang van zaken. Hij stelde dus voor om nieuw schoon eluens te maken en het proefje met de blanco te herhalen.
Ik snap de logica in principe niet die hierachter zou kunnen zitten waarom je dit zou proberen. Je krijgt volgens mij bij nieuw eluens, wat altijd anders zal zijn dan het eluens wat in de oude fles zit, alleen een verschil in absorptie nivo.
Daarbij zal het nieuwe eluens een lager absorptie nivo hebben dan het evt. verontreinigde eluens wat in de oude fles zit.
Maar omdat we ter einde raad waren en niets beters konden bedenken dit toch maar geprobeerd.
Bij de analyse waarover we het nu hebben is de verversingsgraag van het eluens groot, ik schat dat we op jaar basis mischien wel 15 ltr van dit eluens maken.
Gisteren tegen 16.00 uur kwamen de resultaten eruit en wat denk je?
Een totaal vlakke basislijn bij een injectie van een blanco!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Wie kan verklaren welk effect dit kan veroorzaken en zou dit bij de andere analyses waarbij we dit hadden met ander eluensen en andere kolommen ook op te lossen te zijn door gewoon nieuw eleuens te maken??
En hoe moet je nu eigenlijk met eluens omgaan met bewaren e.d.
Dan zou ik verder ook wel willen weten wat ik bij dit nieuw gemaakte eluens zou moeten, of kunnen, gooien om het hierboven opgetreden effect opnieuw in dit nieuwe eleuens te laten ontstaan??????????

Groetjes Harrie

#10

Marjanne

    Marjanne


  • >1k berichten
  • 4771 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 mei 2009 - 09:00

Je post beetje bij beetje informatie maar nog niet helemaal volledig. Probeer eens wat uitgebreider te zijn, zoals:
Wat is je mobiele fase?
Wat is je spoelvloeistof?
Wat is je stationaire fase? ==> Oftewel, wat is je methode?

Dat de bijpiekjes niet met een factor 10 groter worden, heb je het dan over area of height?
Blijven de piekjes na een paar injecties even hoog?
Injecteer je een monster, of alleen een blanco?
Is het chromatogram voor de rest (dus buiten de piekjes om) normaal?
Welke golflengte?

Ik denk toch dat dit soort vragen belangrijk zijn om de oorzaak te vinden.

Werk je isocratisch of met een gradiŽnt? Als het een gradiŽnt is, waar zitten dan je schakelpunten? Wat is de tweede component van je eluens?
Wordt het eluens ontgast tijdens het staan in de eluensfles en zo ja, met welk gas?

Veranderd door Marjanne, 09 mei 2009 - 09:00


#11

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 mei 2009 - 09:15

Hoi Marjanne,
Al onze analyses zijn isocraties.
Spoelvloeistof: MeOH/H2O
Om hier de gehele methode neer te schrijven lijkt mij niets toevoegen omdat dit bij meerdere methodes gebeurt
Tijdens het staan wordt het eleuens niet meer ontgast!!!!!!!

Dit vind ik nu een erg goede vraag/opmerking. Maandag ga ik het oude eluens weer aanlsuiten, kijken of ik de piek in de blanco weer terug kan krijgen en zoja dan ga ik dit oude eluens ontgassen en kijken of de piek dan weg is !!!

Het nieuw gemaakte eluens was vrijdag natuurlijk vers ontgast en had nog niet lang gestaan.
Marjanne erg bedankt

#12

Marjanne

    Marjanne


  • >1k berichten
  • 4771 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 mei 2009 - 10:45

Ik kan me van jaren terug herinneren dat wij hetzelfde probleempje hadden. Volgens de toenmalige leverancier (Spectra Physics) lag dat aan het feit dat wij het eluens in de flessen bij de HPLC¬īs niet ontgasten. Toen daar voorzieningen voor waren gemaakt, was het probleem over.

#13

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 11 mei 2009 - 23:07

Vandaag nogmaals een blanco geprikt met het eluens wat vrijdag vers gemaakt was en toen geen piek in de blanco gaf. Vandaag nog steeds geen piek, het eluens is tussentijds niet meer ontgast.
Vandaag weer het eluens aangesloten wat vrijdag dus wel een piek gaf met de blanco. Deze gaf weer hetzelfde resultaat als vrijdag, een piek dus. Hierna het eluens ontgast ( over een filter getrokken) en na inlopen weer een blanco geprikt. Ik had zeker verwacht geen piek meer te vinden in de blanco. Maar jammer genoeg had het ontgassen geen enkel effect.
Dus het ontgassen van het eluens geeft geen verbetering!!

Daarna op dit eluens waarbij de blanco, met HPLC water, dus een piek geeft een injectie gedaan met het eluens waarbij een injectie geen piek gaf.
Het resultaat was een dal precies met dezelfde retentie tijd als de piek van de blanco.
Hieruit moet toch een conclusie te trekken zijn, alleen ik kan het niet! Wie helpt me de goede kant op??
Wat zou ik aan het goed eluens, waarbij de blanco geen piek geeft toe kunnen voegen zodat daarbij de blanco ook een piek gaat geven.???
Dus Marjanne met ontgassen lijkt het niet op te lossen te zijn. Ik vond idt wel een erg goed idee, maarja zo zie je maar
Groetjes Harrie

#14

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 11 mei 2009 - 23:18

Het gebeurt dus alleen vanuit de eluensfles die steeds bijgevuld wordt?

De wet van Sherlock Holmes zegt: Als alle mogelijkheden zijn uitgeput, blijft de minst waarschijnlijke mogelijkheid over. Mijn gevoel zegt dus dat die fles gewoon vervuild is. Een vervuiling die op zo'n manier met je blanco zal reageren dat er een piek tevoorschijn komt.

Veranderd door Fuzzwood, 11 mei 2009 - 23:19


#15

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 mei 2009 - 06:50

Ja, maar het is bij meerdere analyse voorgekomen. Hoe met het eluens om te gaan om dit te voorkomen?
Wat zou je bij het goede eluens kunnen doen om dit te veroorzaken?
Hoe kun je dit HPLC-technisch verklaren.
Ik zou echt niet weten wat ik aan het eluens toe zou kunnen voegen wat dit dan gaat veroorzaken.
Het is er in ieder geval niet uit te filtreren want direct na filtratie gebeurde het met dit oude eluens weer. Het oude valt trouwens wel mee want van dit eluens wordt wel een 15 liter gebruikt per jaar, in een 2 liter fles. Grote omloopsnelheid.
Wat is trouwens de gehanteerde methode voor het omgaan met eluens?
Ik heb nu bijvoorbeeld de 2 flessen staan, eentje met het goede eluens en eentje met het slechte. Moet ik die slechte wegschudden? Is het goed eluens de volgende keer bij deze analyse nog wel goed ? Mag ik er dan weer vers gemaakt eluens bijschudden?
Ik zou graag de vervuiling of wat dan ook van dit eluens weten zodat je dan gerichte maatregelen kunt nemen!!
Groetjes Harrie





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures