Springen naar inhoud

Absorptiemaximum


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Mejust

    Mejust


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 mei 2009 - 00:20

Sinds ik in aanraking ben gekomen met spectrofotometrie, heb ik me grondig afgevraagd waarom wij bij spectrofotometrie meten op het absorptiemaximum van een stof. Ik heb tot nu toe niet een antwoord gehad dat ik begreep of helemaal geen antwoord gekregen.

Als je bijvoorbeeld een stof hebt en daar een absorptiespectrum van maakt, waar bij 254nm het absorptiemaximum ligt, en bij 700nm een tweede maximum ligt met een lagere extinctie, waarom kan je dan niet dat tweede maximum gebruiken?

Veranderd door Mejust, 11 mei 2009 - 00:21


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Beryllium

    Beryllium


  • >5k berichten
  • 6314 berichten
  • Minicursusauteur

Geplaatst op 11 mei 2009 - 06:34

Dat kan wel hoor. Het heeft alleen gevolgen.

Als je uitgaat van de wet van Lambert-Beer... stel je nou eens voor dat je stof op 254 nm een absorptiemaximum heeft en bij 700 nm een tweede met de helft van de absorptie bij 254 nm. Wat heeft dat voor gevolgen als je een bepaalde hoeveelheid signaal nodig hebt om 'iets' te kunnen meten?
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

#3

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 11 mei 2009 - 09:18

Ik ken ELISA testen die bij 2 golflengtes ijklijnen maken en dan voor de lage concentraties rekenen met met het hoogste extinctiemaximum en voor hoge waarden waarbij mindere nauwkeurigheid geen probleem is met het lage extincie maximum werken.
Dit levert 2 voordelen op:
Je hoeft de test niet verdund over te doen waardoor je tijd en geld bespaart.

#4

Mejust

    Mejust


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 mei 2009 - 10:58

Dat kan wel hoor. Het heeft alleen gevolgen.

Als je uitgaat van de wet van Lambert-Beer... stel je nou eens voor dat je stof op 254 nm een absorptiemaximum heeft en bij 700 nm een tweede met de helft van de absorptie bij 254 nm. Wat heeft dat voor gevolgen als je een bepaalde hoeveelheid signaal nodig hebt om 'iets' te kunnen meten?

Hmm... Als je dus op het tweede maximum meet, zal je vanaf een bepaalde concentratie en daaronder geen signaal meer ontvangen?

Is het trouwens ook niet zo, dat meten op het eerste maximum een grotere onnauwkeurigheid zal geven dan op het tweede maximum?

#5

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 11 mei 2009 - 12:26

Nou niet helemaal. Stel dat ik een monster heb waarvan ik weet dat de concentratie 0,01 mol/l is. Ik meet dat. Bij 254 nm meet ik als extinctie 1, bij 700 nm meet ik als extinctie 0,5. Beide extincties horen wel nog altijd bij die concentratie van 0,01 mol/l. Welke van de 2 golflengtes geeft me dus een grotere helling als ik ook monsters maak van 0,002 - 0,008 mol/l?

En belangrijker: wat zegt de mate van helling over de nauwkeurigheid?

#6

DeeVee

    DeeVee


  • >250 berichten
  • 252 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 11 mei 2009 - 15:54

Los van nauwkeurigheid, resolutie of detectielimiet kan het meten op een 2de maximum interessant zijn als er interferentie of overlapping is van een andere stof rond het eerste maximum

#7

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 11 mei 2009 - 19:59

Een aspect dat tot nu toe hier buiten beschouwing is gebleven, maar dat heel belangrijk is: de lineariteit van de meting.

Zolang je op de top van een absorptiepiek zit (eerste of tweede maakt niet uit) is het met die lineariteit normaal gesproken OK. Zit je op de flank van een piek, en meet je daardoor met een golflengtebandbreedte waarover de absorptie stevig varieert, dan is je absorptie niet meer lineair met de concentratie.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures