Absorptiemaximum

Mejust

Sinds ik in aanraking ben gekomen met spectrofotometrie, heb ik me grondig afgevraagd waarom wij bij spectrofotometrie meten op het absorptiemaximum van een stof. Ik heb tot nu toe niet een antwoord gehad dat ik begreep of helemaal geen antwoord gekregen.

Als je bijvoorbeeld een stof hebt en daar een absorptiespectrum van maakt, waar bij 254nm het absorptiemaximum ligt, en bij 700nm een tweede maximum ligt met een lagere extinctie, waarom kan je dan niet dat tweede maximum gebruiken?

Beryllium

Dat kan wel hoor. Het heeft alleen gevolgen.

Als je uitgaat van de wet van Lambert-Beer... stel je nou eens voor dat je stof op 254 nm een absorptiemaximum heeft en bij 700 nm een tweede met de helft van de absorptie bij 254 nm. Wat heeft dat voor gevolgen als je een bepaalde hoeveelheid signaal nodig hebt om 'iets' te kunnen meten?

Gerard

Ik ken ELISA testen die bij 2 golflengtes ijklijnen maken en dan voor de lage concentraties rekenen met met het hoogste extinctiemaximum en voor hoge waarden waarbij mindere nauwkeurigheid geen probleem is met het lage extincie maximum werken.

Dit levert 2 voordelen op:

Je hoeft de test niet verdund over te doen waardoor je tijd en geld bespaart.

Mejust

Beryllium schreef:Dat kan wel hoor. Het heeft alleen gevolgen.

Als je uitgaat van de wet van Lambert-Beer... stel je nou eens voor dat je stof op 254 nm een absorptiemaximum heeft en bij 700 nm een tweede met de helft van de absorptie bij 254 nm. Wat heeft dat voor gevolgen als je een bepaalde hoeveelheid signaal nodig hebt om 'iets' te kunnen meten?

Hmm... Als je dus op het tweede maximum meet, zal je vanaf een bepaalde concentratie en daaronder geen signaal meer ontvangen?

Is het trouwens ook niet zo, dat meten op het eerste maximum een grotere onnauwkeurigheid zal geven dan op het tweede maximum?

Fuzzwood

Nou niet helemaal. Stel dat ik een monster heb waarvan ik weet dat de concentratie 0,01 mol/l is. Ik meet dat. Bij 254 nm meet ik als extinctie 1, bij 700 nm meet ik als extinctie 0,5. Beide extincties horen wel nog altijd bij die concentratie van 0,01 mol/l. Welke van de 2 golflengtes geeft me dus een grotere helling als ik ook monsters maak van 0,002 - 0,008 mol/l?

En belangrijker: wat zegt de mate van helling over de nauwkeurigheid?

DeeVee

Los van nauwkeurigheid, resolutie of detectielimiet kan het meten op een 2de maximum interessant zijn als er interferentie of overlapping is van een andere stof rond het eerste maximum

rwwh

Een aspect dat tot nu toe hier buiten beschouwing is gebleven, maar dat heel belangrijk is: de lineariteit van de meting.

Zolang je op de top van een absorptiepiek zit (eerste of tweede maakt niet uit) is het met die lineariteit normaal gesproken OK. Zit je op de flank van een piek, en meet je daardoor met een golflengtebandbreedte waarover de absorptie stevig varieert, dan is je absorptie niet meer lineair met de concentratie.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Absorptiemaximum

Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum

Re: Absorptiemaximum