Springen naar inhoud

Smeltcurve analyse


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 28 mei 2009 - 12:20

Hoi!

Ik ben bezig met de qPCR en is er van een aantal monsters een smeltcurve bepaald, natuurlijk wil ik graag weten of deze monsters primer-dimeren vormen of dat er ook daadwerkelijk PCR product is geamplificeerd.

De primer die gebruikt is TH01 met zijn Tm-waarden: A-> Tm=62 en B->Tm=79

- Nu heb ik een grafiek gekregen waarvan meerdere monsters eendezelfde piek vertonen, deze ligt bij een melttemperature van 77,0.
- 1 monster geeft een piek bij 74,50
- een andere monster een piek bij 75,0

Ik weet niet hoe ik deze data kan analyseren, kan iemand mij helpen?

Is dit voldoende informatie?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

hzeil

    hzeil


  • >1k berichten
  • 1379 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 28 mei 2009 - 15:18

Neen, niet voor mij. Ik kan uit Uw bericht niet opmaken welke stof of welk stofmengsel U aan het smelten bent. Evenmin kan ik begrijpen in welke grafiek U pieken krijgt. Betreft het een thermoanalytisch onderzoek aan een mengsel van stoffen?
Uitleggen is beter dan verwijzen naar een website

#3

Snuffel

    Snuffel


  • >25 berichten
  • 78 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 28 mei 2009 - 17:04

Hoi!!

Ik heb DNA geisoleerd uit bloed, ik wil een bepaald locus amplificeren met de marker/primer TH01. Met deze smeltcurve wil ik bepalen of de primers geen dimeren met elkaar hebben gevormd en dus of de fluorescentie die gemeten wordt afkomstig is van mijn DNA-template en niet van mogelijk gevormde primer dimeren.

Ik gebruik SYBR Green, dit straalt fluoresentie af bij ieder dubbelstrengsDNA, dus ook bij primer dimeren. Nu kan er met de smeltcurve bepaald worden of je ook daadwerkelijk PCR-product hebt zonder het te elektroforeren. Maar ik weet dus niet hoe ik dit moet doen..

#4

hzeil

    hzeil


  • >1k berichten
  • 1379 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 28 mei 2009 - 21:59

Bedankt, een beetje uitleg was wel nodig. Uw werk is verregaand specialistisch. Hopenlijk treft U op dit forum nog een collega met DNA ervaring.
Uitleggen is beter dan verwijzen naar een website





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures