Springen naar inhoud

SPE - verlies van signaal


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Fluterd

    Fluterd


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 06 juli 2009 - 14:50

Hallo,

Ik weet niet of dit de juiste plaats is voor volgende vraag, maar misschien kan er toch iemand me verder helpen.

Ik heb een LC-MS/MS methode voor 2 basische componenten geoptimaliseerd (C18 kolom, gradient met A water met 25mM ammoniumformaat op pH 3 en B MeOH en 0.1% mierenzuur). Deze werkt mooi voor de standaardoplossing.

Nu heb ik een SPE-method op Bond Elut Certify kolommen (mixed mode SPE) die ik zou willen gebruiken voor analyse van urine en bloed.

Ik zit echter met volgend probleem.
Ik doe de SPE met blanco water (dus conditioneren, wassen, en dan elutie zonder dat de eigenlijk componenten aanwezig zijn), het gelueerde solvens damp ik dan in. Wanneer ik hieraan na het indampen dan de standaardoplossing toevoeg en deze injecteer zie ik een signaal verlies tussen 25- en 50% vergeleken met de injectie van pure standaard!!
Wanneer ik simpleweg het elutiesolvent indamp en dan standaard aan toevoeg, zie ik een verlies van 5-10% (wat kan verklaard worden door overbrengen enz).

Heeft er iemand dit probleem ook? Wat zou ik eraan kunnen doen?

Alvast bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 juli 2009 - 17:43

Hoe elueer je de analieten en wat zijn deze precies? LAgere recoveries zijn niet zo'n probleem mits het lineair is en reproduceerbaar.

Als je niet alle details geeft, blijft het koffiedik kijken.

#3

Fluterd

    Fluterd


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2009 - 12:49

Hallo,

Ik heb het al eens geprobeerd met 2 elutiosolventen (gebaseerd op literatuur voor de elutie van basische componenten op mixed-mode SPE):
1) 2/10/88 NH4OH / ACN / ethylacetate
2) 2/20/78 NH4OH /isopropanol/ CH2Cl2

Beide gaven hetzelfde resultaat.

Het probleem is dat ik nog niet eens aan recovery toe ben, de componenten elueren niet van de kolom maar worden pas toegevoeg na indampen van het elutiosolvent en dan heb ik al een signaalverlies!!!

Alvast bedankt voor je advies!

#4

ajonker

    ajonker


  • >250 berichten
  • 306 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2009 - 14:51

Beste Fluterd,

de kolom die je gebruikt (Bond Elut Certify) is ontwikkeld voor zure componenten, niet basische (volgens de website van de fabrikant)!

wat betreft het grote verlies:

Als ik je goed begrijp, voeg je de standaard toe aan het elutiemiddel en dan heb je t.o.v. een directe prik van de standaard een groot verlies?

Dan kan het volgens mij zo zijn dat de standaard wordt afgebroken door je elutiemiddel(?)

#5

Fluterd

    Fluterd


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2009 - 14:58

Hallo,

Volgens mij zijn de Bond Elut Certify kolommen wel degelijk bedoeld voor basische componenten : "The Certify extraction cartridge utilizes a packed bed consisting of a special, non-polar C8 sorbent and a strong cation exchanger (SCX). Certify is most commonly used to extract basic (cationic) drugs from urine and blood, but it is also very effective for extraction of a wide range of compounds from all manner of aqueous matrices." (komt van de site van Varian)

Ik damp het elutiemiddel in, daarna voeg ik standaard toe en dit injecteer ik.
Wanneer ik het elutiemiddel rechtstreeks indamp (dwz zonder dat het langs de SPE kolom loopt) en dan standaard toevoeg is er geen enkel probleem. Het elutiesolvent valt dus uit te sluiten als oorzaak.

Groetjes

#6

Fluterd

    Fluterd


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2009 - 15:15

Het gebruikte protocol is trouwens ook afkomstig van Varian en is specfiek bedoeld voor de analyse van deze basische componenten op deze SPE-cartridges!

#7

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 juli 2009 - 14:10

Algemene protocollen zijn alleen guide lines maar hoeven niet per definitie te werken. Welke basen gebruik je? Als je een quaternairy amine hebt dan is een SXC natuurlijk te sterk, omdat je de ladingen niet verbreken kunt. Op dit moment kan ik niet zeggen wat het probleem is omdat je de structuren niet geeft.

Ik zou eens verschillende fracties opvangen. Dus 1x elueren, nog een keer elueren etc. Elke fractie indampen en dan kijken of je het analiet terug krijgt. Probeer de oorzaak te isoleren. Is het incomplete elutie dan zou ik eens gaan kijken of het ionische of hydrofobe interacties zijn die je moet verbreken.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures