Springen naar inhoud

Estervorming


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 juli 2009 - 14:02

Ik wil de stof flavine mononucleotide (FMN) kwantitatief meten met behulp van LC-MS/MS. FMN is een analyte met oa 5 OH-groepen (zie onder). Nu kom ik gevoeligheid tekort en wil daarom proberen te derivatiseren. In de literatuur zie ik dat er propionyl anhydride gebruikt om deze analyte te derivatiseren. Dit zal estervorming geven met de OH-groep(en) van de analyte. Mijn vraag is, kan ik niet gewoon propionzuur gebruiken ipv propionyl anhydride? Dit zou toch hetzelfde resultaat moeten geven?

Bedankt.


Geplaatste afbeelding

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 14 juli 2009 - 14:10

Het kan inderdaad, maar hou dan wel rekening mee dat je ester-evenwicht wat naar links ligt en dat je een overmaat zuur nodig gaat hebben.

Zoals je van carbonzuurzuur + alcohol weet, geeft dat ester + water. Dit is een evenwicht reactie.

Zuuranhydride + alcohol geeft echter ester + carbonzuur. Hier is nagenoeg geen sprake van een terugreactie.

Overigens heb je maar 3 echte OH groepen. Die van het fosfaat tellen niet mee omdat die zullen reageren als een carbonzuur.

Veranderd door Fuzzwood, 14 juli 2009 - 14:11


#3

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 juli 2009 - 14:48

Bedankt voor de snelle reactie.

Mijn analyte zit wel in een waterige omgeving. Valt het propionyl-anhydride dan niet uiteen in 2 moleculen propionzuur voordat het ook maar zijn werking als anhydride kan uitvoeren?

#4

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 juli 2009 - 19:22

Waarom denk je gevoelighied te winnen op deze manier?

Ik betwijvel ten zeerste of je de esters kun vormen in waterig milieu trouwens.

#5

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 06:54

Beste Napoleon,

Door er hydrofobe groepen aan te hangen zal ik meer retentie krijgen op een RP-kolom en dus zal de component er in een hoger %organisch eluent af komen. Dit lijkt me een goede zaak bij MS. Verder is het idee dat door het derivatiseren de oppervlakte-aktiviteit van het molecuul wordt verhoogd wat bij electrospray voor een hogere respons zou moeten zorgen.

Does this make any sense?

#6

molecular

    molecular


  • >100 berichten
  • 195 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 07:03

Derivatiseren van polaire analyten is niet ongewoon, maar ik denk niet dat het op deze manier gaat werken. Je kunt geen propionzuur gebruiken i.p.v. het anhydride, tenzij je dit onder watervrije condities bij hoge temperatuur in aanwezigheid van een sterk zuur doet. Zelfs met een anhydride is het acyleren van alcoholen helemaal geen snelle reactie. In waterig milieu is dit helemaal moeilijk, want (zoals ik wel eens zeg): water is de kleinste alcohol! (Beetje kort door de bocht natuurlijk, maar in veel opzichten (zo ook hier) gaat dit zeker op.)

#7

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 10:01

Ik heb zelf wat ervaring met MS/MS analyses van methotrexate polyglutamates, dit is ook gebaseerd op dezelfde heterocycle (pteridines/flavines) waar jij mee bezig bent.

Ik ben het helemaal met je eens dat een hoger % organisch helpt, zeker als je onder de 20-30% zit, hierna maakt het niet veel meer uit. Ik vraag me echter af of het derivatiseren van die alcoholen gaat helpen hoor voor ionizatie efficientie. Wat gebruik je? positieve of negative ionmode?

Ik zelf heb erg veel geluk gehad met een ionpaar methode. Wij gebruikten 5mM dimethylhexylamine (vluchtig) als ionpaar, dit resulteerde in meer retentie en verbeterde ionizatie, plus we vormden alleen maar de singly charged spieces.

#8

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 10:19

Ik gebruik ESI+, ESI- geeft een minder signaal. De ionisatie-efficientie wordt een stuk beter volgens deze publicatie.

Ik heb zelf ook wel aan ionpair-reagentia gedacht, ik weet alleen niet of de andere gebruikers op de MS hier zo blij van worden. Gaan zij geen hinder krijgen van mijn ion-pair reagens?

Verder is het wel aardig dat hierna de MTX-PG's op ons verlanglijstje staan om te gaan opzetten. Is recent nog een leuk artikel over verschenen voor op de MS. Zie hier.

#9

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 12:13

Ik ken de publicatie. Over 2 weken gaat hier ons manuscript weg waar we een 10x gevoelerige methode hebben ontwikkeld voor MTXPGs in rode bloed lichaampjes van reuma patienten. Ook waren we instaat MTXPG6-7 te detecteren wat andere mensen nog niet gedaan hebben. (standaarden zijn wel gedetecteerd maar niet in patienten).

Over je ionpair reagens. Ja het is vrij lastig uit je systeem te krijgen. De massa spectrometer is schoon na een front end cleaning. Het ionpair reagens is wat lastiger uit de LC te krijgen. Vooral in frits blijft het plakken. Gewoon een aantal liter zuur water er doorheen spoelen en het is weg.

#10

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 13:19

Ik overweeg om eventueel een HILIC-kolom te proberen. Wat denken jullie?

Interessant die MTX-PG's. Toevallig ervaring met meting daarvan in witte bloedcellen?

#11

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juli 2009 - 17:07

efficiency is niet zo hoog met hilic maar moet kunnen werken.

Mensen meten typisch gezien MTXPGs in rode bloedcellen. Ik heb geen ervaring of literatuur gelezen over MTXPGs in witte bloed cellen. De methode die voor rode bloedcellen werkt moet ook werken in rode bloedcellen is mijn vermoeden. Uit intresse, waarom zijn jullie geinteresseerd in witte bloedcellen?

Ik dacht dat mensen geintereseerd waren in rode bloedcellen omdat deze afstammen van het beenmerg, waar MTXPGs vaak actief zijn.

#12

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 juli 2009 - 17:54

Zit inmiddels op een eiland in de Middellandse Zee, kom hier over een week of twee op terug.
Groeten en dank voor de input.

#13

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 16 juli 2009 - 18:36

Zit inmiddels op een eiland in de Middellandse Zee, kom hier over een week of twee op terug.
Groeten en dank voor de input.

[off topic] In dat geval, zwem ze :D [/offtopic]

#14

Bertrand_CF

    Bertrand_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 augustus 2009 - 10:14

Napoleon,
Bij reuma patienten werkt MTX oa als ontstekingsremmer, een proces waarbij de witte cellen uiteraard nauw betrokken zijn, veel meer dan de rode cellen. Het idee is dan ook dat de MTX-PG's in de witte cellen mogelijk een betere afspiegeling geven van de klachten van de patient dan de MTX-PG's in de rode cellen.

Een nadeel is uiteraard het feit dat de witte cellen wat minder makkelijk beschikbaar zijn dan de rode. Verder zijn onze eerste ervaringen wat wisselend doordat we verschillende recoveries vinden die ook nog eens erg laag zijn. Mogelijk blijven de MTX-PG's plakken aan allerhande cel-componenten. We hebben dus nog aardig wat werk te verzetten. Het gaat hier om een MALDI-triple quad, dus gebruiken we een nogal verschillende voorbewerking van het materiaal dan wanneer het om een gewone triple-quad gaat.

Ben ook benieuwd naar jullie artikel, zie het over een tijdje wel verschijnen.

Groeten.

#15

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 september 2009 - 19:43

Ik heb gelezen dat vooral het beenmerg hier een rol speelt. Hier stammen uiteraard ook de rodebloed cellen van af. Verder is de levensduur van rode bloed cellen 6 maanden, waardoor ze zegmaar de totaal som geven van wat er over 6 maanden gebeurd. Tevens blijkt dat methotrexate in reuma patienten 6 maanden nodig heeft om te werken. Toeval?

Verder is de ontstekingsremmende werking van MTX met name toegedicht aan het in situ genereren van adenosine. Adenosine heeft sterke ontstekings remmende effecten.

Maargoed leuk te horen dat jullie het over die boeg gooien. De beste methode is zeker nog niet gevonden, en ook rode bloed cellen zijn het niet. Ik heb echter nog een ander idee, dat ik nu nog niet zeggen kan.

De publicatie is trouwens al 3 weken in review bij Rapid communications in mass spectrometry.

Leon

Veranderd door Napoleon1981, 04 september 2009 - 19:52






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures