Springen naar inhoud

dode tijd: uracil


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Little witch

    Little witch


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 oktober 2009 - 14:17

Ik heb met hplc gewerkt. Een C18 kolom en de mobiele fase hebben we gevarieerd van methanol/water:100/0 tot methanol/water:50/50
Om de dode tijd te bepalen hebben we uracil gebruikt. Omdat we erachter kwamen dat die niet veel retentie zou hebben.
Nu kregen we op een gegeven moment steeds vaker 2 pieken bij uracil (die soms ook bijna even groot waren!), dus waarschijnlijk is deze vervuild geraakt. In de meeste gevallen was de 2e piek die er uit kwam groter. Is dit dan onze Uracil geweest? Kan het dus zo zijn dat er nog een stof (of lucht??) eerder uit de kolom kwam dan onze uracil?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Little witch

    Little witch


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 oktober 2009 - 14:46

Ik weet niet of het handiger is om hier weer een nieuwe vraag van te maken, maar ik zet hem er maar gewoon bij.
We hebben in bovenstaande kolom een mengsel van stoffen geinjecteerd. Hier kwam een goed chromatogram uit toen de methanol/water verhouding 50/50 was. Maar we hebben ook losse componenten geprobeerd te injecteren (o.a. 1,3 dinitrobenzeen) deze gaven afgevlakte punten (en dit kwam niet doordat ze aan de bovenkant van het papier af kwamen). We hebben met de range en attenuation geprobeerd te spelen maar dat hielp niet (we kregen alleen hele kleine afgevlakte pieken). Weet iemand hoe dit kan komen en hoe we het hadden moeten voorkomen?

#3

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 oktober 2009 - 14:48

Je kan dat best achterhalen door een nieuwe, verse oplossing van uracil te maken, en te injecteren. Blijft de dubbele piek, dan scheelt er wat aan het systeem.

Dubbele pieken kunnen o.a. te wijten zijn aan een void (lege ruimte) aan te top van de kolom. Dit kan je testen door een mengsel van enkele producten te injecteren. Als alle pieken verdubbeld zijn wordt het tijd om de kolom (of de voorkolom) te vervangen.

Lucht (in de detector) uit zich normaal als exessieve ruis, of een sinuso´dale basislijn.

#4

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 oktober 2009 - 14:49

Die "sigaarvormige" pieken zijn normaal te wijten aan de detector overload. Verdun je monster 10 keer en injecteer opnieuw.

#5

Little witch

    Little witch


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 30 oktober 2009 - 15:13

Bedankt voor je reactie Jooken!
Ik heb nu niet meer de tijd om het experiment te herhalen of aanpassingen te maken. Maar om het uit te werken moet ik wel de dode tijd weten. Als er bij uracil 2 pieken uit komen moet ik dan de grootste nemen voor de dode tijd of de eerste (of juist de 2e)? En klopt het dat de dode tijd langer word naarmate er meer water in de oplossing komt? Ik wist wel dat water visceuzer was en dat mijn componenten er langer over zouden doen en zo beter scheidden, maar doet uracil er ook langer over? ( het lijkt wel zo..)

#6

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 november 2009 - 13:21

De dode tijd is inderdaad (een beetje) functie van de samenstelling van de mobiele fase. Dat lkomt omdat de stationaire fase wat anders gesolvateerd wordt door veschilklende mobiele fasen, en er dus wat meer of minder ruimte vrij is. Het verschil is echter gewoonlijk klein en meestal niet significant.

De beste benadering is de retentietijd is om de retentietijd te nemen van de eerste piek. Als die piek zeer intens is, kan je misschien beter de tiujd nemen waar de flank van de piek omhoog gaat.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures