Ik ben bezig met het opzetten van een HPLC analysemethode voor topiramaat (TPM). Hierin wordt TPM gederivatiseerd met 4-chloro-7-nitrobenzofurazan (NBD-Cl). Amlodipine wordt meegenomen als I.S. en wordt dus ook gederivatiseerd.
Ik meet zuivere TPM (10 ug/ml) en amlodipine (5 ug/ml), de piekoppervlakte van TPM is ongeveer 600 en van de I.S. 3300.
Hoe kan het dat deze piekoppervlakten zoveel van elkaar kunnen verschil, terwijl ze met dezelfde stof gederivatiseerd worden?
Daarnaast wijken gelijken I.S. concentraties soms wel meer dan 10% af van het gemiddelde. Terwijl deze monsters tegelijk zijn gemaakt.
Ik hoop dat iemand mij hier mee kan helpen.
Laatste berichten
-
12:40
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 16
-
12:35
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 9
-
12:01
Gravity and gravitation 1
-
10:15
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
09:54
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 6
-
23:07
Rood laserlicht 2
-
15:28
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
12:51
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
-
23 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 7
-
23 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
23 apr
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
23 apr
projectiel 8
-
23 apr
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
23 apr
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Piek intensiteit
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
1) Wat is de detectie methode?
2) Als UV gebruikt is, wat is de golflengte?
2) Als UV gebruikt is, wat is de golflengte?
-
- Berichten: 14
Re: Piek intensiteit
ik gebruik een fluorescentie detector en meet bij een excitatie van 470 nm en een emissie van 537 nm.
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
Wat is de nucleofiel in beide stoffen?
Wat is je eindproduct?
Zitten er significante verschillen in electron zuigende kracht van de substituenten aan je fluorofoor? De substituenten zijn in dit geval je analiet en je IS.
Kan je dus een (klein) verschil verwachten in excitatie en emissie golflengte en dus verschil in respons --> piek oppervlakte?
Wat is je eindproduct?
Zitten er significante verschillen in electron zuigende kracht van de substituenten aan je fluorofoor? De substituenten zijn in dit geval je analiet en je IS.
Kan je dus een (klein) verschil verwachten in excitatie en emissie golflengte en dus verschil in respons --> piek oppervlakte?
-
- Berichten: 14
Re: Piek intensiteit
Het nucleofiel is in beide gevallen een primair stikstof.
TPM is idd beter instaat om elektronen te zuigen, dus het is idd logisch dat deze een kleiner respons geeft.
Daarnaast heeft amlodipine een geconjugeerd systeem en zou daarom ook de absorptie kunnen bevorderen?
TPM structuurformule:
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/comm...iramate.svg.png
Amlodipine structuurformule:
http://www.medicinescomplete.com/mc/clarke...clk0095c001.gif
TPM is idd beter instaat om elektronen te zuigen, dus het is idd logisch dat deze een kleiner respons geeft.
Daarnaast heeft amlodipine een geconjugeerd systeem en zou daarom ook de absorptie kunnen bevorderen?
TPM structuurformule:
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/comm...iramate.svg.png
Amlodipine structuurformule:
http://www.medicinescomplete.com/mc/clarke...clk0095c001.gif
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
Je zit nu op het juiste pad.
Ik vind je naam geving nog niet helemaal goed.
De reactieve groep in TPM is een sulfonamide vs een primaire amine.
Die sulfonamide is inderdaad heel erg electronen zuigend. Ik verwacht dus dat de golflengte waarbij nitrobenzofuran aangeslagen wordt iets omlaag zal gaan.
Het geconjugeerde systeem is zeker een goede observatie, maar ik denk niet dat dit een rol speeld omdat er een "spacer" tussen zit en ook niet zal absorberen rond de 470nm.
Btw, ik verwacht ook dat die sulfonamide een veel slechtere nucleofiel is dan een primaire amine, dus misschien ook nog eens incomplete derivatizatie.
Ik vind je naam geving nog niet helemaal goed.
De reactieve groep in TPM is een sulfonamide vs een primaire amine.
Die sulfonamide is inderdaad heel erg electronen zuigend. Ik verwacht dus dat de golflengte waarbij nitrobenzofuran aangeslagen wordt iets omlaag zal gaan.
Het geconjugeerde systeem is zeker een goede observatie, maar ik denk niet dat dit een rol speeld omdat er een "spacer" tussen zit en ook niet zal absorberen rond de 470nm.
Btw, ik verwacht ook dat die sulfonamide een veel slechtere nucleofiel is dan een primaire amine, dus misschien ook nog eens incomplete derivatizatie.
-
- Berichten: 14
Re: Piek intensiteit
Ja je hebt gelijk, maar de echt juiste benaming van de reactieve TPM groep is sulfamaat 
Ik moet nog gaan kijken naar het optimaliseren van mijn derivatisering. Het kan idd zo zijn dat TPM niet volledig reageert. Als de herhaalbaarheid maar goed is. Wat nu nog niet het geval is, ook niet voor de I.S.
Ik moet nog gaan kijken naar het optimaliseren van mijn derivatisering. Het kan idd zo zijn dat TPM niet volledig reageert. Als de herhaalbaarheid maar goed is. Wat nu nog niet het geval is, ook niet voor de I.S.
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
http://en.wikipedia.org/wiki/Ammonium_sulfamate
http://en.wikipedia.org/wiki/Sulfonamide_%28chemistry%29
Sulfamaat is dus fout.
-aat ergens achter geeft aan dat het de geconjugeerde base is. Ik zie in je TMP nergens een negatieve lading zitten.
http://en.wikipedia.org/wiki/Sulfonamide_%28chemistry%29
Sulfamaat is dus fout.
-aat ergens achter geeft aan dat het de geconjugeerde base is. Ik zie in je TMP nergens een negatieve lading zitten.
-
- Berichten: 14
Re: Piek intensiteit
waarom is de IUPAC benaming dan: 2,3:4,5-Bis-O-(1-methylethylidene)-beta-D-fructopyranose sulfamaat?
http://nl.wikipedia.org/wiki/Topiramaat
http://nl.wikipedia.org/wiki/Topiramaat
-
- Berichten: 306
Re: Piek intensiteit
"-aat ergens achter geeft aan dat het de geconjugeerde base is. Ik zie in je TMP nergens een negatieve lading zitten."
De negatieve lading zit bij de NH2-groep!
De SO3-groep heeft een lading van -2, de gekoppelde NH2 groep is een elektrongevende groep, waardoor deze van zichzelf wat positiever wordt,
maar dit is onvoldoende t.o.v. de 3 zuurstofatomen om een positieve lading te krijgen! Dus het gehele SO3-NH2-groep blijft negatief!
De negatieve lading zit bij de NH2-groep!
De SO3-groep heeft een lading van -2, de gekoppelde NH2 groep is een elektrongevende groep, waardoor deze van zichzelf wat positiever wordt,
maar dit is onvoldoende t.o.v. de 3 zuurstofatomen om een positieve lading te krijgen! Dus het gehele SO3-NH2-groep blijft negatief!
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
@ajonker Die zit er dus niet, een R-NH2 groep is gewoon ongeladen.
Ik praatte over de het TMP molecuul.
http://nl.wikipedia.org/wiki/Topiramaat
In de vrije vorm zit die negatieve lading er wel ja.
http://en.wikipedia.org/wiki/Ammonium_sulfamate
Maar zelfs dan ziet hij niet op de NH2 positie natuurlijk.
Ik praatte over de het TMP molecuul.
http://nl.wikipedia.org/wiki/Topiramaat
In de vrije vorm zit die negatieve lading er wel ja.
http://en.wikipedia.org/wiki/Ammonium_sulfamate
Maar zelfs dan ziet hij niet op de NH2 positie natuurlijk.
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
Tja een sulfonamide is een R groep ipv een O op die plek. Ik vind de naamgeving niet echt sterk, maargoed misschien is sulfamaat iets dichter bij omdat de structuur iets gedetailleerder beschreven wordt dan met die van de sulfonamide.IronMan2 schreef: waarom is de IUPAC benaming dan: 2,3:4,5-Bis-O-(1-methylethylidene)-beta-D-fructopyranose sulfamaat?
http://nl.wikipedia.org/wiki/Topiramaat
Maargoed, wat ik je probeerde uit te leggen was dat het geen primaire amine was. Niet in naamgeving en ook zeker niet in reactiviteit.
-
- Berichten: 14
Re: Piek intensiteit
Ja, je hebt idd gelijk over de verschillende reactiviteit.
Mijn I.S. (amlodipine) geeft trouwens ook twee pieken. Zou het kunnen dat de stikstof van de pyridine groep ook voor een gedeelte met mijn fluorochroom (NBD-Cl) reageert?
Mijn I.S. (amlodipine) geeft trouwens ook twee pieken. Zou het kunnen dat de stikstof van de pyridine groep ook voor een gedeelte met mijn fluorochroom (NBD-Cl) reageert?
-
- Berichten: 2.399
Re: Piek intensiteit
Dat is geen pyridine , pyridine is aromatisch en zal denk ik niet reageren (je vormt dan een quartenair stikstof atoom). Deze secundaire amine kan zeker reageren.
, pyridine is aromatisch en zal denk ik niet reageren (je vormt dan een quartenair stikstof atoom). Deze secundaire amine kan zeker reageren.
