Springen naar inhoud

verklaring verschuiving in retentietijd


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Olivier_CF

    Olivier_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 maart 2010 - 16:11

beste,
wie kan ons helpen met een logische verklaring voor volgend fenomeen:

Wij wensen een mengsel van paramethylbezoŽzuur (C - benzeenring - COOH) en butaanzuur (C-C-C-COOH) te scheiden op een RP C18-kolom. We gebruiken hiervoor een solventsamenstelling van 60% ACN / 40% H2O.
Butaanzuur komt er als laatste van de twee uit, maar is onvoldoende gescheiden van het paramethylbenzoŽzuur.

Door de solventsamenstelling nu polairder te maken dachten we minder retentie te kunnen geven aan paramethylbezoŽzuur (omwille van zijn polariseerbare benzeenring) en meer retentie aan butaanzuur, om alsnog de pieken te kunnen scheiden. Echter, dit blijkt niet te werken.

Door de solventsamenstelling nu apolairder te maken schuiven beide pieken op naar links (minder retentietijd) maar wordt wel een betere scheiding verkregen!!

Dit is in tegenstelling met onze redenering dat het polartiseerbare paramethylbenzoŽzuur een verschil in retentie kan geven door het solvent polairder te maken.

Met andere woorden: hoe apolairder het solvent, hoe beter de scheiding. Dit terwijl de structuurformules aangeven dat we juist polairder moeten werken om deze uiteen te krijgen.

Welke factoren spelen hierin een doorslag gevende rol ?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

keyzplayer

    keyzplayer


  • >100 berichten
  • 115 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 maart 2010 - 11:36

We gebruiken hiervoor een solventsamenstelling van 60% ACN / 40% H2O.



Je bent dus twee verbindingen die volledig gedissocieerd zijn (pH zit zeker 2 eenheden boven de pKa van beide verdindingen) te scheiden op een RP kolom.

Beide stoffen zijn als ion aanwezig dus zou ik niet meer spreken van meer of minder polair.

Door meer ACN in je eluens te doen komt alles sneller van de kolom af zoals te verwachten is bij een C18-kolom. Omdat er minder water aanwezig is kan ik me voorstellen dat er minder dissociatie optreedt waardoor de pieken smaller worden en dus de resolutie verbeterd.

Probeer je eluens eens te bufferen op een lage pH (kijk even welke pH je kolom nog kan verdragen)

#3

Olivier_CF

    Olivier_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 maart 2010 - 14:38

Alvast bedankt voor deze input.

ons water is niet gebufferd, maar wel aangezuurd zodat we steeds onder de pKa-waarden blijven. Het verschil in piekbreedte is voor beide componenten te verwaarlozen, zodat de resolutiewinst niet kan verklaard worden door smallere pieken.

Echter, het verschil in dissociatie door een mindere hoeveelheid water lijkt ons een aanneembare uitleg.

Helaas hebben we niet veel mogelijkheden om met deze solventsamenstelling te spelen omdat het staal zeer complex is om te scheiden. Uw antwoord geeft ons wel een beter inzicht in het algemeen verloop van onze analyse.

bedankt daarvoor

#4

Psylor

    Psylor


  • >25 berichten
  • 87 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 maart 2010 - 15:56

Door het verhogen van de flowrate verkort je ook de retentietijd, let wel, een te hoge flow rate zorgt voor minder interactie met het kolom.
Weet niet wat voor detector je hebt, maar als je gebruik maakt van een elektrochemische detector dan moet je bij een hogere flowrate ook opletten dat het signaal versterkt wordt, dus bij een ED geen flowrate gradientie toepassen.

Zuren en water zijn over het algemeen polair, door een apolaire eluens te gebruiken zullen je componenten dus als het waten in het kolommateriaal geduwt worden en de retentietijd verhogen. In een polaire eluens voelen polaire stoffen zich wel thuis, dus zullen ze minder snel interactie vormen met het kolommateriaal.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures