[scheikunde] transformeren

Nazz20

Kan iemand mij uitleggen wat transformeren is? Het experiment die daarbij hoort:

In deze studietaak is het de bedoeling om vanuit het plasmide pGLO (coderend voor het full-length GFP eiwit) een plasmide te maken die voor een deletiemutant van GFP codeert. Dit kan je doen door in het coderende deel van het GFP gen een stukje uit te knippen en het plasmide daarna terug te ligeren. Het is de bedoeling om het terug-geligeerde plasmide in competente cellen van E.coli te transformeren en de getransformeerde bacteriën uit te pla-ten op LB + Amp platen. Van hieruit kan later het plasmide in E.coli opgewerkt worden.

Het was dus de bedoeling om het GFP-gen eruit te knippen en dan het plasmide weer te ligeren.

De GFP-gen is eruit en geeft geen groene licht meer m.b.v. fluorescentie.

De bovenstaande experiment wordt vervolgt en er wordt arabinose toegevoegt. En na 2 uur in een schudstoof bevat het weer het GFP-gen (want er was een groene licht).

Kan iemand mij uitleggen hoe dit mogelijk is? en wat transformeren is en wat arabinose doet??

Nazz20

kan niemand mij helpen> a.s. donderdag heb ik een presentatie en ik weet 100% zeker dat ze mij vragen hierover gaan stellen...

Tsjerk

Weet je zeker dat je in het GFP gen hebt geknipt? Dan kan er natuurlijk nooit opeens weer GFP gemaakt worden. Ik denk dat je een ander stuk van je plasmide hebt geknipt.

Namelijk het deel codeerend voor de transcriptiefactor voor je GFP. Je gooit er hier echter weer een stof bij waarna er opeens weer GFP aanwezig is. Je geeft erg weinig informatie maar ik denk dat je arabinose de inducer van de promoter voor je GFP gen is.

Nazz20

Tsjerk schreef: Weet je zeker dat je in het GFP gen hebt geknipt? Dan kan er natuurlijk nooit opeens weer GFP gemaakt worden. Ik denk dat je een ander stuk van je plasmide hebt geknipt.

Namelijk het deel codeerend voor de transcriptiefactor voor je GFP. Je gooit er hier echter weer een stof bij waarna er opeens weer GFP aanwezig is. Je geeft erg weinig informatie maar ik denk dat je arabinose de inducer van de promoter voor je GFP gen is.

volgens de opdracht wordt de coderende deel van de GFP-gen geknipt. Maar ik dacht dat dat juist voor dat groene licht zorgde.

Tsjerk

Het groene licht wordt inderdaad door het GFP veroorzaakt, maar dat kan alleen wanneer het gen en daarmee het eiwit compleet is. Als je dus fluorescentie krijgt nadat je in het plasmide hebt geknipt heb je niet in het "reading frame" van GFP geknipt.

Zoek je plasmide eens op op wikipedia, daar staat aardig wat uitleg.

Van transformeren weet ik niet de exacte definitie maar het houdt onder anderen in dat je organismen plasmiden geeft en ze dus genetische veranderd.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

[scheikunde] transformeren

[scheikunde] transformeren

Re: [scheikunde] transformeren

Re: [scheikunde] transformeren

Re: [scheikunde] transformeren

Re: [scheikunde] transformeren