Springen naar inhoud

Immunologie: probleem met ELISA


  • Log in om te kunnen reageren

#1

*_gast_Bella_*

  • Gast

Geplaatst op 20 maart 2011 - 19:27

Ik heb een aantal ELISA's uitgevoerd tbv cytokines in serum. De volgende stappen zijn gedaan:
1. coating met specifieke ab
2. blocking met BSA
3. stalen opgebracht: standaardreeks en de serumstalen onverdund en 1/2 verdund met PBST-B. Tevens is er een blanco
4. Specifieke ab toegevoegd
5. SPP cinjugaat
6. TMB oplossing

Tussen iedere stap is er 6x gewassen met PBST (muv na het blokken).

De standaardreeks ziet er heel goed uit: r2=0,998 Normaliter trek je de blanco van alle resultaten af. En daar zit nu het probleem. De blanco is ongeveer 0,1. De hoogste standaard zit rond de 0,8-1,4. Indien ik van alle resultaten de blanco aftrek, dan zijn de uiteindelijke berekende concentraties van de onverdunde en de verdunde stalen totaal verschillend. Indien ik de blanco NIET aftrek van de onverdunde stalen dan komen de concentraties wel redelijk met elkaar overeen.

Mijn vraag is: kan het zijn dat de BSA die in de PBST-B zit voor een hogere blanco heeft gezorgd, waardoor het inderdaad kan kloppen dat je de blanco niet van de onverdunde stalen (die hadden nl geen PBST-B) moet aftrekken, of is er een andere oorzaak voor dit probleem?

Ik hoop dat iemand mij hiermee kan helpen....

Bella

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 20 maart 2011 - 20:33

Ik kan het zo niet zien, de PBST/BSA kan een probleem geven bij de binding maar erg waarschijnlijk is het niet.
Kun je de ruwe data eens geven misschien dat ik je dan verder kan helpen.

Veranderd door Gerard, 20 maart 2011 - 20:33


#3

daan6119

    daan6119


  • >25 berichten
  • 27 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 maart 2011 - 13:14

hoelang heb je tussen de stappen door geincubeerd en bij hoeveel graden hier kan zich ook nog een probleem vormen te hoog kan het zijn dat ab's kapot gaan.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures